荧光光谱法研究头孢匹罗、头孢吡肟、硝基羟乙唑与溶菌酶的反应机理

发布时间：2017-07-15 20:18

  本文关键词：荧光光谱法研究头孢匹罗、头孢吡肟、硝基羟乙唑与溶菌酶的反应机理

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【摘要】：近年来,随着人类疾病发病率的增加,药物已离不开人们的日常生活,研究药物小分子与蛋白质相互作用的课题已是人们关注的热点,本文以溶菌酶为研究载体,研究硫酸头孢匹罗,盐酸头孢吡肟,硝基羟乙唑与溶菌酶的相互作用,并在传统荧光光谱法的基础上用同步荧光光谱法和改进光谱法来研究药物和蛋白的相互作用机理。研究内容共分以下五部分:第一章:介绍了蛋白和药物的结合作用对药物在体内的吸收,分布,代谢等生理活性及药物的疗效和蛋白质结构和功能的改变的影响,并对蛋白质和药物小分子相互作用的光谱方法研究进行了综述,共引用参考文献51篇。第二章:通过荧光猝灭法和同步荧光光谱法,分别研究了不同温度下硫酸头孢匹罗(CPS)与溶菌酶(LYSO)之间的猝灭反应机制。研究表明,CPS以静态猝灭方式使LYSO的荧光强度降低,结合常数均为104数量级,其结合位点数约为1;并以静电引力方式相互结合形成LYSO-CPS复合物;Hill系数nH略大于1,说明CPS和LYSO之间存在着很弱的正协同效应。两种方法所得的结论基本一致,表明同步荧光光谱法也可用于LYSO与药物小分子结合机制的研究。并用圆二色光谱法检测CPS对LYSO的猝灭反应引起的蛋白质分子二级结构的变化。第三章:利用荧光猝灭法和同步荧光光谱法,研究了不同温度下盐酸头孢吡肟(CPH)与溶菌酶(LYSO)之间的相互作用。结果表明,两种方法所得CPH和LYSO之间反应的猝灭方式、结合常数、结合位点数、作用力类型等基本一致,表明同步荧光光谱法在研究药物和溶菌酶机理方面是一种有益的补充。第四章:在不同温度下,利用荧光光谱法研究了pH=7.40生理条件下硝基羟乙唑(TRI)与溶菌酶(LYSO)的相互作用机理。结果表明,TRI与LYSO间通过静态猝灭方式相互作用。并测定了TRI与LYSO反应的结合常数、结合位点数;利用反应过程的热力学参数确定了TRI与LYSO反应体系的作用力类型;由Hill系数得出了TRI与LYSO的协同性;根据非辐射能量转移理论,确定了TRI到LYSO的结合距离,同时采用了同步光谱法考察了TRI对LYSO构象的影响。第五章:为解决荧光猝灭法分析药物与蛋白相互作用机理中存在的不足,在人的生理条件(pH=7.40),以药物为检测对象,用弹性散射(RLS)荧光法研究不同温度下硝基羟乙唑(TRI)与溶菌酶(LYSO)相互作用机理。对比以LYSO为考察对象的荧光猝灭法,两种方法所得TRI与LYSO作用机理一致,但RLS法所得体系结合常数比荧光猝灭法大两个数量级,表明RLS法能够更全面、准确的表征TRI与LYSO的作用。并用UV光谱法对RLS法所得结果的合理性进行了验证。
【关键词】：荧光光谱法 溶菌酶 硫酸头孢匹罗 盐酸头孢吡肟 硝基羟乙唑
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96;O657.3
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 综述13-17
• 1.1 引言13
• 1.2 溶菌酶结构简介13
• 1.3 药物和蛋白质相互作用的研究方法13-16
• 1.3.1 荧光光谱法14
• 1.3.2 紫外-可见吸收(UV)光谱法14-15
• 1.3.3 圆二色(CD)光谱法15
• 1.3.4 共振光散射(RLS) 法15-16
• 1.4 本文的立题思路及研究内容16
• 1.5 展望16-17
• 第2章 荧光猝灭法、同步荧光法用于硫酸头孢匹罗与溶菌酶反应机理比较研究17-26
• 2.1 引言17
• 2.2 实验部分17-18
• 2.2.1 仪器与试剂17-18
• 2.2.2 实验步骤18
• 2.3 结果与讨论18-25
• 2.3.1 LYSO-CPS体系的UV光谱18-19
• 2.3.2 LYSO-CPS体系的荧光猝灭光谱19-21
• 2.3.3 LYSO的氨基酸残基参与情况确定21
• 2.3.4 LYSO-CPS体系的同步荧光光谱21-23
• 2.3.5 LYSO-CPS体系的作用力类型23-24
• 2.3.6 药物协同性24-25
• 2.3.7 LYSO-CPS体系的CD光谱25
• 2.4 结论25-26
• 第3章 盐酸头孢吡肟与溶菌酶反应机理荧光猝灭法、同步荧光法比较研究26-32
• 3.1 引言26
• 3.2 实验部分26-27
• 3.2.1 仪器与试剂26-27
• 3.2.2 实验步骤27
• 3.3 结果与讨论27-31
• 3.3.1 LYSO-CPH体系的UV光谱27-28
• 3.3.2 LYSO-CPH体系的荧光猝灭光谱28-29
• 3.3.3 LYSO-CPH体系的同步荧光光谱29-30
• 3.3.4 CPH与LYSO间的作用力类型30-31
• 3.4 结论31-32
• 第4章 硝基羟乙唑与溶菌酶反应机制的光谱研究32-38
• 4.1 引言32
• 4.2 实验部分32-33
• 4.2.1 仪器与试剂32
• 4.2.2 实验步骤32-33
• 4.3 结果与讨论33-37
• 4.3.1 LYSO-TRI体系的荧光猝灭光谱33-34
• 4.3.2 LYSO-TRI体系作用力类型34-35
• 4.3.3 药物协同性35
• 4.3.4 LYSO-TRI体系的结合距离35-36
• 4.3.5 LYSO-TRI体系的同步荧光光谱36-37
• 4.4 结论37-38
• 第5章 改进光谱法研究硝基羟乙唑和溶菌酶的相互作用机理38-44
• 5.1 引言38
• 5.2 实验部分38-39
• 5.2.1 仪器与试剂38
• 5.2.2 实验步骤38-39
• 5.3 结果与讨论39-43
• 5.3.1 LYSO-TRI体系的荧光猝灭光谱39-40
• 5.3.2 LYSO-TRI体系的RLS法40-41
• 5.3.3 LYSO-TRI 体系的 UV 光谱41-42
• 5.3.4 LYSO-TRI体系作用力的研究42
• 5.3.5 药物协同性42-43
• 5.4 结论43-44
• 参考文献44-53
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文53-54
• 致谢54

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1 韩荣;荧光光谱法研究头孢匹罗、头孢吡肟、硝基羟乙唑与溶菌酶的反应机理[D];河北大学;2016年

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本文编号：545589