毛发皮质酮为啮齿类动物内源性应激标记的验证

发布时间：2017-07-30 20:21

  本文关键词：毛发皮质酮为啮齿类动物内源性应激标记的验证

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【摘要】：皮质酮是由大鼠等啮齿类动物的肾上腺皮质分泌的一种糖皮质激素。啮齿类动物体内皮质酮与新陈代谢、中枢神经系统、心血管系统以及免疫系统等生理功能密切相关,是啮齿类动物主要的应激激素。过去的研究使用的生物标记是血液皮质酮、尿液皮质酮、脑组织皮质酮和粪便皮质酮,这些生物标记不能可靠地反映长期慢性应激的基础水平。毛发皮质酮可能是新型的可靠标记,然而目前尚未有研究验证其可靠性。鉴于此,本研究旨在验证毛发皮质酮为啮齿类动物的内源性应激标记。首先,本研究基于高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS),选用大气压化学离子源正离子模式,在多反应监测方式下建立了测定啮齿类动物血液、毛发和脑组织皮质酮含量的分析方法。具体方法：20 mg毛发样本经甲醇清洗,加内标溶液,于甲醇中室温下孵育24 h,孵育液再经C18固相萃取柱进行提纯、除杂、富集,进入LC-MS/MS系统进行测定。血液样本经离心,取50 μl的上层血样,加内标溶液,经乙酸乙酯进行液液萃取,N2吹干后用流动相重新定容,进入LC-MS/MS系统进行测定。20 mg的下丘脑组织和前额叶组织的预处理方法和血样的方式一致。该方法的定量限可达到1.25 pg/mg(大鼠毛发)、0.5 ng/ml(大鼠血液)、1.25 pg/mg(大鼠脑组织)和2.5 pg/mg(小鼠毛发和血液),日内、日间变异系数均小于10%,加标回收率在84.2%-108.0%。其次,利用该方法检测正常大鼠、小鼠的毛发皮质酮和血液皮质酮的关联性以及经历慢性应激的大鼠、小鼠与正常对照组之间的皮质酮含量差异。结果显示,正常大鼠和小鼠的毛发皮质酮的含量与血液皮质酮的含量显著正相关(ps0.05),但与前额叶和下丘脑的皮质酮含量不相关。接受生理应激的大鼠与社会击败应激的小鼠,其毛发皮质酮含量与血液皮质酮含量均显著高于正常对照组(ps0.05)。这些结果表明,毛发皮质酮是啮齿类动物的可靠的慢性应激生物标记。
【关键词】：毛发皮质酮 血液皮质酮 脑组织皮质酮 高效液相色谱串联质谱 社会击败应激
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q57;O657.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 绪论11-13
• 第二章 综述13-24
• 2.1 皮质酮的生理心理作用13-14
• 2.2 生物样本14-15
• 2.3 现有的皮质酮检测方法15-19
• 2.3.1 荧光法15-16
• 2.3.2 免疫法16
• 2.3.3 高效液相色谱-紫外可见分光光度法16-17
• 2.3.4 气相色谱串联质谱法17-18
• 2.3.5 高效液相色谱串联质谱法18-19
• 2.4 现有研究存在的不足和问题19-21
• 2.5 论文的研究目的、意义和内容21-24
• 2.5.1 研究目的21
• 2.5.2 研究意义21-22
• 2.5.3 研究内容22-24
• 第三章 分析方法的建立与基质效应的研究24-37
• 3.1 引言24
• 3.2 实验24-28
• 3.2.1 实验动物模型的建立24-25
• 3.2.2 实验仪器25
• 3.2.3 实验试剂25-26
• 3.2.4 溶剂配制26
• 3.2.5 实验条件26-27
• 3.2.6 空白基质的选取及预处理27-28
• 3.2.7 基质效应研究28
• 3.3 实验结果与讨论28-35
• 3.3.1 离子对选择28-29
• 3.3.2 样品和基质加标的色谱质谱图29-33
• 3.3.3 基质效应研究33-35
• 3.4 小结35-37
• 第四章 分析方法的验证37-45
• 4.1 引言37
• 4.2 实验37-40
• 4.2.1 实验仪器37-38
• 4.2.2 实验试剂38
• 4.2.3 色谱条件38
• 4.2.4 质谱条件38
• 4.2.5 溶液的配制38-39
• 4.2.6 样品的处理步骤39-40
• 4.3 结果和讨论40-42
• 4.4 小结42-45
• 第五章 毛发皮质酮的内源性验证45-57
• 5.1 引言45
• 5.2 实验45-49
• 5.2.1 实验仪器45-46
• 5.2.2 实验试剂46
• 5.2.3 实验动物模型的建立46-47
• 5.2.4 色谱条件47
• 5.2.5 质谱条件47
• 5.2.6 溶液配制47
• 5.2.7 毛发、血液以及脑组织样品的采集及预处理47-48
• 5.2.8 统计方法48-49
• 5.3 实验结果和讨论49-55
• 5.3.1 正常大鼠和小鼠中毛发皮质酮和血液皮质酮的相关性49-52
• 5.3.2 实验组与对照组啮齿类动物毛发皮质酮含量的变化52-55
• 5.4 小结55-57
• 第六章 结论57-60
• 参考文献60-69
• 致谢69-71
• 作者简介71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王菊霞;张卫国;张灵菲;张小刚;麻安卫;;啮齿动物粪便类固醇的分析方法及其意义[J];草业科学;2015年10期

2 马晓斐;吕品;李挥;张岩;;液相色谱-串联质谱法同时测定人血清中皮质酮与皮质醇[J];分析测试学报;2013年07期

3 王U，

本文编号：595978