高速逆流色谱法分离纯化艾叶化学成分、提取条件优化及结构鉴定

发布时间：2017-07-31 21:10

  本文关键词：高速逆流色谱法分离纯化艾叶化学成分、提取条件优化及结构鉴定

  更多相关文章： 艾叶 响应面法 高速逆流色谱法 分离纯化

【摘要】：目的:通过单因素试验、正交法、响应面法优化艾叶总黄酮的提取条件,并采用制备型HSCCC分离纯化艾叶中的化学成分,建立超声波辅助提取做前期提取—溶剂萃取做预纯化—HSCCC做分离纯化—UV、HPLC、LCMS-IT-TOF、1H-NMR做最终分析鉴定的技术流程,为艾叶进一步的药理活性及临床研究提供技术支持,为其他中药及天然产物中化合物的分离纯化提供技术依据。方法:(1)以芦丁为标准品建立标准曲线,采用Na NO2-Al(NO3)3-Na OH比色法对黄酮进行显色,用紫外分光光度法测定艾叶中总黄酮的含量并进行方法学验证。(2)以总黄酮提取率为指标,选取甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮四种溶剂对艾叶进行提取,筛选出艾叶总黄酮的最佳提取溶剂。(3)以总黄酮提取率为指标,采用浸提法、回流提取法、超声波提取法对艾叶进行提取,筛选出艾叶总黄酮的最佳提取方法。(4)选取提取时间、提取温度、料液比和体积分数四个因素在各水平下进行单因素实验,确定单因素下的最佳提取条件。(5)选取四因素三水平,以总黄酮提取率为指标,采用正交法对艾叶总黄酮提取条件进行优化,得出正交法的最佳提取条件。(6)选取四因素三水平,以总黄酮提取率为指标,采用响应面法对艾叶总黄酮提取条件进行优化,得出响应面法的最佳提取条件。(7)确定HPLC分离艾叶化学成分的条件,通过HPLC测定艾叶化学成分在各溶剂体系中的K,筛选HSCCC最佳溶剂体系。(8)采用制备型HSCCC分离纯化艾叶中的化学成分,通过HPLC检测得到符合纯度要求的各单体化合物。(9)通过UV、HPLC、LCMS-IT-TOF、1H-NMR对化合物进行结构鉴定并计算产率。结果:(1)建立了紫外分光光度法测定艾叶总黄酮含量的方法且方法学考察结果良好。(2)甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮对艾叶总黄酮的提取率分别为4.3%、4.08%、2.42%、1.79%,所以本实验采用甲醇作为艾叶总黄酮的最佳提取溶剂。(3)浸提法、回流提取法、超声波提取法对艾叶总黄酮的提取率分别为1.12%、4.01%、4.63%,所以本实验采用超声波提取法作为艾叶总黄酮的最佳提取方法。(4)单因素实验下的最佳提取条件为提取时间30min、提取温度70℃、料液比1:40、甲醇体积分数60%,总黄酮提取率为4.29%。(5)正交实验法的最佳提取条件为提取时间40min、提取温度80℃、料液比1:30、甲醇体积分数70%,总黄酮提取率为4.85%。(6)响应面法的最佳提取条件为提取时间46 min、提取温度74℃、料液比1:42,甲醇体积分数66%,总黄酮提取率为6.85%。(7)HPLC法分离艾叶化学成分的条件为柱温:25℃;流速:1.0 m L/min,流动相:A(乙腈),B(0.4%冰乙酸):0 min,10%A;10min,25%A;20 min,35%A;30 min,60%A,35min,80%A;37min,80%A;40 min,10%A;43 min,10%A,检测波长为280nm。(8)通过K的测定,筛选出正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(3:7:4:6,v/v/v/v)为最佳两相溶剂系统,以上相为固定相,下相为流动相,在流速2 m L/min,转速900 r/min,检测波长280 nm的条件下对粗提物进行制备分离,共得到5个单体化合物,经HPLC检测纯度分别为98.47%,95.65%,95.48%,93.06%,98.17%。(9)一次进样100mg样品得到11.0、3.6、4.1、7.5、10.3mg 5个单体化合物,产率分别为:11.0%、3.6%、4.1%、7.5%、10.3%;经结构鉴定5个单体化合物分别为异绿原酸A、木犀草素、矢车菊黄素、棕矢车菊素、异泽兰黄素。结论:(1)建立了紫外分光光度法测定艾叶总黄酮的方法,该方法简便快速,可准确测定出艾叶中的总黄酮含量。(2)确定艾叶总黄酮的最佳提取溶剂为甲醇,最佳提取方法为超声波提取法,本实验采取这两种方法,快速高效地提取艾叶中的总黄酮。(3)通过对比单因素试验、正交法、响应面法这三种条件优化方法,确定最佳的条件优化方法为响应面法,本实验采用响应面法优化艾叶总黄酮的提取条件,经济高效地提取艾叶中的总黄酮。(4)确定了HPLC分离艾叶化学成分的条件,分离时间短且分析效果好。(5)本实验首次采用HSCCC分离纯化艾叶中化学成分,对艾叶中5种单体化合物进行一步分离,该方法简单高效,对艾叶化学成分在食品医疗领域的应用具有重要意义。(6)建立了超声波强化萃取做前期提取-溶剂萃取做预纯化-HSCCC做分离纯化-UV、HPLC、LCMS-IT-TOF、1H-NMR做最终分析鉴定的技术流程,为其他中药及天然产物中化合物的分离纯化提供技术依据。
【关键词】：艾叶 响应面法 高速逆流色谱法 分离纯化
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R284;O657.7
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 第一章 前言13-17
• 第二章 艾叶中总黄酮含量的测定17-24
• 2.1 实验药品、试剂与仪器17-18
• 2.2 实验方法18-20
• 2.3 结果与分析20-23
• 2.4 小结与讨论23-24
• 第三章 艾叶总黄酮提取条件的优化24-43
• 3.1 实验药品、试剂与仪器24-25
• 3.2 实验方法25-27
• 3.3 结果与分析27-41
• 3.4 小结与讨论41-43
• 第四章 HSCCC分离艾叶中的化学成分43-61
• 4.1 实验药品、试剂与仪器43-44
• 4.2 实验方法44-46
• 4.3 结果与分析46-59
• 4.4 小结与讨论59-61
• 第五章 化合物的结构鉴定61-71
• 5.1 实验药品、试剂与仪器61-62
• 5.2 实验方法62-63
• 5.3 结果与分析63-70
• 5.4 小结与讨论70-71
• 第六章 结论与讨论71-74
• 6.1 结论71-72
• 6.2 本论文创新之处72
• 6.3 展望72-74
• 参考文献74-77
• 附录 1：英文缩略词索引77-78
• 附录 2：综述78-88
• 参考文献85-88
• 攻读硕士学位期间的主要成果88-89
• 致谢89

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 余汉谋;姜兴涛;肖海鸿;代丽;;高速逆流色谱法在天然香料单离中的应用[J];香料香精化妆品;2012年01期

2 欧霞;李劲平;佘志坚;潘阳;;高速逆流色谱法在天然药物研究中的应用概况[J];中南药学;2014年03期

3 袁黎明,傅若农,张天佑,邓锦辉,李西宁;高速逆流色谱法分离茶叶中的生物碱[J];色谱;1998年04期

4 蔡定国;顾明娟;吴建均;邵茹辛;吴腈斋;李德平;;高速逆流色谱法用于甜味剂阿司帕坦的提纯和杂质鉴别[J];中国医药工业杂志;1993年11期

5 江和源,程启坤,杜琪珍;高速逆流色谱法分离纯化茶黄素[J];天然产物研究与开发;2000年04期

6 许旭旭;毛政;吴斌;孙洪林;何冰芳;;高速逆流色谱法分离纯化内吗啡肽-1[J];化工进展;2011年09期

7 陈德经;韩豪;董博妮;;高速逆流色谱法分离纯化绿原酸研究[J];食品科学;2008年11期

8 石雪萍;吴亮亮;张卫明;;高速逆流色谱法分离花椒中的黄酮化合物[J];食品科学;2013年12期

9 谢贵香;王兵;梁逸曾;杨朝晖;;高速逆流色谱法对当归中石油醚萃取部位化学成分的分离纯化[J];分析测试学报;2010年10期

10 王继勇;何浏;袁晓;;高速逆流色谱法纯化丹酚酸B工艺研究[J];化学与生物工程;2010年09期

中国重要会议论文全文数据库 前5条

1 陈苏伟;蔡纪青;胡志浩;;高速逆流色谱法及其在中药分离中的应用[A];浙江省临床合理用药和药剂学术研讨会论文集[C];2007年

2 谢贵香;梁逸曾;王兵;杨朝晖;;高速逆流色谱法对当归中石油醚萃取部分的有效成分的分离纯化[A];中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集[C];2010年

3 朱晓娜;曹伟伟;朱金花;李明静;;高速逆流色谱法分离制备槐花中的黄酮类化合物[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年

4 姜华;;高速逆流色谱法分离西兰花籽中的硫代葡萄糖苷[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年

5 蔡海林;杜良伟;刘祥英;陈桂华;王彦辉;柏连阳;;高速逆流色谱法分离前胡提取物中的香豆素类功能成分[A];公共植保与绿色防控[C];2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 李熹;高速逆流色谱法分离纯化艾叶化学成分、提取条件优化及结构鉴定[D];湖南师范大学;2016年

2 苏杭;高速逆流色谱法分离微藻中活性物质的研究[D];烟台大学;2012年

3 曹晓莹;高速逆流色谱法对玉米须及废次烟草有效成分的分离纯化[D];北京化工大学;2008年

4 王燕;高速逆流色谱法用于线虫脂质组学的研究[D];东北大学;2011年

，

本文编号：601129