基于切刻内切酶信号放大的电致化学发光DNA生物传感器的研究

发布时间：2017-08-29 05:39

  本文关键词：基于切刻内切酶信号放大的电致化学发光DNA生物传感器的研究

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【摘要】：利用切刻内切酶的酶切作用实现信号放大,结合量子点高效的电化学发光性能,构建了一种新型电化学发光DNA生物传感器。将捕获探针DNA(c-DNA)通过自组装的方式固定到金电极表面,后与目标DNA(t-DNA)互补杂交形成双链DNA,利用切刻内切酶Nt.Bst NBI特异性识别双链上的酶切位点(5'-GAGTC-3'),然后在c-DNA相应的切割位点(识别序列3'端后的4个碱基处)对其进行剪切,释放出目标链,参与下一轮的杂交及酶切,通过目标物的循环利用,实现信号放大。利用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺(EDC)活化羧基化Cd Te量子点表面的羧基,与电极表面残留的c-DNA末端的氨基共价交联,通过测定捕获的量子点的电化学发光信号对目标DNA进行检测。优化后的检测条件为:c-DNA浓度1μmol/L,杂交时间60 min,Nt.Bst NBI浓度0.5 U/μL,酶切反应时间4 h。在优化条件下,目标DNA浓度在2.0×10~(-13)~2.0×10~(-11)mol/L范围内,其对数与电化学发光强度呈线性关系,检出限为7.3×10~(-14) mol/L。人体血样加标回收率为96.4%~108.0%。
【作者单位】： 电磁化学功能物质广西重点实验室桂林理工大学化学与生物工程学院;
【关键词】： DNA生物传感器 切刻内切酶 量子点 电致化学发光 信号放大
【基金】：国家自然科学基金项目(Nos.21165007,21375031)资助~~
【分类号】：O657.1;TP212
【正文快照】： 1引言近年来,随着生命科学的不断发展,低浓度特定DNA序列的超灵敏检测在临床诊断、基因突变检测等生物学研究中显示出越来越重要的作用和意义[1~4]。与荧光法[5]、石英晶体微天平法[6]、比色法[7]等众多的DNA检测方法相比,电化学发光法因其方法简单、响应速度快、灵敏度高和选

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本文编号：751628