基于“分段”-“完整”转化的G-四链体脱氧核糖核酸酶传感器用于多聚核苷酸激酶的检测

发布时间：2017-08-31 21:33

  本文关键词：基于“分段”-“完整”转化的G-四链体脱氧核糖核酸酶传感器用于多聚核苷酸激酶的检测

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【摘要】：采用"分段"转化为"完整"G-四链体脱氧核糖核酸酶的策略,构建了检测多聚核苷激酶(T4 PNK)的传感器。将形成G-四链体的富G序列PS5.M序列拆分成5'和3'端均为羟基的两条链:链S_1OH和链S_2OH即分别具有12个碱基的"分段"的PS5.M。在ATP存在下,T4 PNK酶可以将链S_2OH的5'端的羟基磷酸化,转化为S_2P;在S_1OH、S_2P以及Helper链S-H存在下,T4 DNA连接酶(T4 DNA Ligase)将链S_1OH和链S_2P连接成"完整"的PS5.M序列。在体系中再加入核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ),从S-H的3'端剪切S-H,释放出PS5.M。在K~+存在下,PS5.M与氯化血红素(Henfin)作用,形成具有类过氧化物酶活性的复合物,催化H_2O_2氧化2 2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的反应,通过检测氧化产物在418 nm处的吸收值变化,实现对T4 PNK活性的定量检测。线性检测范围为0.02~3.0 U/mL舱出限为0.014 U/mL(S/N=3)。对Hela细胞和HEK293细胞实际样本的T4 PNK活性进行了检测,平均回收率为95.6%~105.7%。
【作者单位】： 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所;
【关键词】： 多聚核苷酸激酶 脱氧核糖核酸酶 G-四链体 生物传感器
【基金】：国家自然科学基金(Nos.31301495,21275156,21305154)资助~~
【分类号】：O657.3;TP212
【正文快照】： 1引言T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)是Richardson于1965年研究T4噬菌体侵袭大肠杆菌的过程中发现的[1]。T4 PNK酶可以催化ATP的γ-位或3'-单磷酸核苷的磷酸基团与寡核苷酸链(双链DNA和单链DNA或RNA)的5'-羟基基团进行转移和交换,实现寡核苷酸的5'磷酸化或者3'去磷酸化,在基因克隆

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1 陶芒娟;T4多聚核苷酸激酶活性和抑制的荧光分析研究[D];陕西师范大学;2014年

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本文编号：768067