基于双链特异性核酸酶介导的MicroRNAs检测新方法的研究

发布时间：2017-09-01 22:18

  本文关键词：基于双链特异性核酸酶介导的MicroRNAs检测新方法的研究

  更多相关文章： MicroRNAs检测 DSN核酸酶 信号扩增 纳米金 聚多巴胺纳米球 化学发光共振能量转移

【摘要】：MicroRNAs(miRNAs)是由大的发卡型前体经过Dicer等酶的加工形成的小的、内源性非编码RNA,其长度约22个碱基左右。miRNAs可以通过组装成为有活性的RNA诱导的沉默复合物(RISC)来抑制基因表达。大量研究表明,miRNAs在细胞分化、细胞凋亡、免疫应答等多种生物过程中起着重要作用。大量研究表明,miRNAs的异常表达跟癌症的发生和形成息息相关,可以作为生物标记物用于诊断和预知及作为新药的作用靶标用于疾病治疗。双链特异性核酸酶(duplex-specific nuclease,DSN)是一种来自勘察加半岛拟石蟹属螃蟹胰肝腺中的核酸酶。DSN酶具有独特的底物特异性,只降解双链DNA及DNA/RNA杂交链中的DNA链,不可水解单链DNA、单链RNA及双链RNA。此外,DSN酶在一定长度内可以区分单碱基差异,赋予了DSN酶更加独特的性质。因此,DSN酶作为工具酶在生物医药、生物科学应用及生物分析等领域具有重要的应用前景。利用DSN酶的独特性质,将其作为信号放大工具应用于miRNAs的特异性检测,可以克服许多由miRNAs自身特点带来的检测弊端,包括家族序列同源性高难以区分、长度短难以检测及表达水平低等问题。我们利用DSN核酸酶的特性,结合纳米金消光系数大以及聚多巴胺纳米球(PDA)具有独特的吸附单链核酸及化学发光共振能量转移的特点,分别设计了纳米金聚集比色法及化学发光共振能量转移法用于miRNAs的特异性检测,操作简便,成本低廉,检测限可达pM级,并应用于细胞裂解液中miRNAs的分析检测。
【关键词】：MicroRNAs检测 DSN核酸酶 信号扩增 纳米金 聚多巴胺纳米球 化学发光共振能量转移
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.3
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第1章 绪论9-24
• 1.1 miRNA检测9-14
• 1.1.1 miRNA介绍9-10
• 1.1.2 miRNA作为癌症生物标志物特点10
• 1.1.3 miRNA检测的意义10-11
• 1.1.4 miRNA检测的方法11-14
• 1.1.5 展望14
• 1.2 DSN酶在分析检测领域的应用14-21
• 1.2.1 DSN酶简介14-15
• 1.2.2 基于DSN酶介导的miRNA检测15-21
• 1.3 纳米技术的优势21-23
• 1.4 本研究的内容及意义23-24
• 第2章 双链特异性核酸酶性质的研究24-34
• 2.1 引言24-25
• 2.2 实验部分25-30
• 2.2.1 实验材料及主要仪器25-26
• 2.2.2 实验步骤26-30
• 2.3 实验结果与讨论30-33
• 2.3.1 金属离子对DSN酶活性的影响30
• 2.3.2 溶液的pH值对DSN酶活性的影响30-31
• 2.3.3 反应温度对DSN酶活性的影响31
• 2.3.4 双链DNA为底物的DSN酶特性的探究31-32
• 2.3.5 以DNA-RNA为底物的DSN酶特性的探究32-33
• 2.4 小结33-34
• 第3章 基于双链特异性核酸酶介导的纳米扩增比色法特异性检测miRNA34-50
• 3.1 引言34-35
• 3.2 实验原理35-36
• 3.3 实验部分36-41
• 3.3.1 实验材料及仪器36-38
• 3.3.2 实验步骤38-41
• 3.4 实验结果与讨论41-48
• 3.4.1 可行性分析41-42
• 3.4.2 纳米金聚集前后及修饰前后的表征42-43
• 3.4.3 实验条件优化43-45
• 3.4.4 灵敏度研究45-46
• 3.4.5 选择性研究46-47
• 3.4.6 实样检测47-48
• 3.5 小结48-50
• 第4章 基于双链特异性核酸酶和聚多巴胺纳米球介导的化学发光共振能量转移平台检测miRNA50-66
• 4.1 引言50-51
• 4.2 实验原理51-52
• 4.3 实验部分52-57
• 4.3.1 实验材料及仪器52-53
• 4.3.2 实验步骤53-57
• 4.4 实验结果及讨论57-65
• 4.4.1 PDA的表征57
• 4.4.2 可行性分析57-59
• 4.4.3 实验条件优化59-61
• 4.4.4 灵敏度研究61-62
• 4.4.5 选择性实验62-63
• 4.4.6 实样检测63-65
• 4.5 小结65-66
• 第5章 总结与展望66-68
• 参考文献68-75
• 附录75-76
• 致谢76-78
• 卷内备考表78

【相似文献】

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王芸;陶筱川;吕应堂;;水稻MicroRNAs在水稻发育过程中的功能研究[A];湖北省植物生理学会第十五次学术研讨会论文集[C];2007年

2 周宁;陈宝元;曹洁;汤华;刘民;邓园;王彦;;microRNAs在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清中的表达及意义[A];中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编[C];2013年

3 韦晖;王成;范钰;许琪;张辰宇;沈岩;;偏执型精神分裂症血浆microRNAs表达谱的筛查[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年

4 单志新;余细勇;林秋雄;符永恒;邓春玉;杨敏;林曙光;;microRNAs、炎症因子及其受体基因在自发性高血压大鼠中的表达[A];第九届全国心血管药理学术会议论文集[C];2007年

5 郭士伟;刘蔼民;;小RNA(MicroRNAs)的发现、结构和功能[A];2006年中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年

6 郑宗基;刘晓萌;张雷;赵倩伟;李晨钟;薛耀明;;β3肾上腺素受体激动剂对C57BL/6J小鼠脂肪组织棕色化相关基因和microRNAs的影响[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年

7 李海怡;高璐;左洪亮;钟国华;;昆虫microRNAs功能研究进展[A];公共植保与绿色防控[C];2010年

8 刘红;韩璐璐;谢爽;娄莹;蒋娟娟;田蕾;许莉;李一石;;连续口服厄贝沙坦对健康中国志愿者血浆MicroRNAs表达的影响[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

9 方巧云;杨森;张学军;;MicroRNAs及其在皮肤病上的应用[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

10 韩璐璐;刘红;康健;边文彦;庞会敏;李一石;;冻存血浆中MicroRNAs稳定性评价[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 詹芸;MicroRNAs在乳腺癌侵袭转移过程中的功能与机制研究[D];北京协和医学院;2015年

2 周可树;MicroRNAs在慢性淋巴增殖性疾病中的表达及其在慢性淋巴细胞白血病预后中的意义研究[D];中国协和医科大学;2010年

3 刘雯静;胰腺癌特异性microRNAs的筛选及机制研究[D];北京协和医学院;2011年

4 于双妮;胰腺癌差异表达microRNAs的鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2008年

5 熊薇;微泡microRNAs在肝癌诊断及发病机制中的作用研究[D];华中科技大学;2012年

6 陈娜;STAT3介导microRNAs调控的IL-9过表达在慢性淋巴细胞性白血病免疫调节机制中的研究[D];山东大学;2014年

7 高刚;氡致肺癌及肺损伤相关microRNAs的研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年

8 张彩彩;硫化氢通过microRNAs调控血管新生的机制研究[D];复旦大学;2011年

9 孔维威;一氧化碳调节拟南芥缺铁反应及缺铁响应microRNAs的鉴定[D];南京农业大学;2009年

10 顾艳斐;一、microRNAs对肺癌细胞系生物学行为的影响及非小细肺癌组织中microRNA的表达与NSCLC预后及TKIs疗效的分析二、x-TAG液相芯片技术检测126例中国人非小细胞肺癌EGFR、B-Raf、K-Ras基因突变情况研究及临床疗效的相关性分析[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 谭志军;microRNAs在人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化中的作用研究[D];天津医科大学;2015年

2 罗婷;microRNAs与慢性阻塞性肺疾病的研究进展[D];重庆医科大学;2015年

3 王倩;基于双链特异性核酸酶介导的MicroRNAs检测新方法的研究[D];华东理工大学;2016年

4 张继磊;炎症相关因子和microRNAs在胃MALT淋巴瘤中发病机制的探讨[D];第二军医大学;2012年

5 罗晓燕;桃microRNAs鉴定及内参基因的筛选[D];南京农业大学;2013年

6 肖玲;胚胎干细胞RNAs与microRNAs相互作用网络研究[D];华中师范大学;2012年

7 罗书芳;干旱胁迫下丹参microRNAs差异表达谱分析[D];陕西师范大学;2013年

8 张译云;毛白杨低温胁迫相关microRNAs的鉴定及差异表达分析[D];北京林业大学;2012年

9 李楠楠;小麦microRNAs的序列分析与验证[D];西北农林科技大学;2008年

10 张小庆;水稻MAPKKs基因功能鉴定和microRNAs靶模拟材料构建[D];华中农业大学;2011年

，

本文编号：774717