酶放大的流动注射化学发光免疫传感器的构建及在食品违禁添加剂中的应用

发布时间：2017-09-18 17:04

  本文关键词：酶放大的流动注射化学发光免疫传感器的构建及在食品违禁添加剂中的应用

  更多相关文章： 流动注射 化学发光免疫分析 免疫传感器 酶放大 沙丁胺醇 二氧化硅 溴布特罗

【摘要】：流动注射分析(FIA)速度快,自动化程度高。化学发光免疫分析法(CLIA)灵敏度高,特异性好,线性范围宽。将两种技术结合,建立的FI-CLIA综合了二者的优点,备受广大科研工作者的青睐。本论文利用新型的羧基化树脂珠作固相载体,同时引入酶标抗体或者以纳米二氧化硅材料为载体的复合物,建立了酶催化放大的化学发光免疫传感器,分别对食品中的β-受体激动剂沙丁胺醇和溴布特罗进行快速、灵敏的检测。该类方法的建立在食品添加剂残留及其他小分子的检测方面有重要的应用前景。本论文主要包括四个方面:1.介绍论文的研究背景及意义。详述流动注射技术,化学发光免疫分析基本原理与类型,常见的化学发光体系以及用于FI-CLIA的固定化载体。2.采用新型的羧基化树脂珠负载包被抗原,同时引入辣根过氧化物酶,利用其对鲁米诺-过氧化氢发光体系的酶催化增强作用,建立了一种操作简单、分析快速、检测灵敏的测定沙丁胺醇的流动注射化学发光免疫分析法。3.探索实现CL信号放大的策略,并制备了分散性良好、粒径均匀的二氧化硅纳米颗粒。利用硅烷偶联剂(APTES)和戊二醛(GA)对Si O2表面功能化,用于负载辣根过氧化物酶(HRP)和抗体(Ab)。借助傅里叶变换红外(FT-IR)光谱、透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)等手段对制备的材料进行了表征。4.将上述制备的二氧化硅、酶和抗体复合物(HRP-Si O2-Ab)用于FI-CLIA,由于负载了大量的HRP,实现了酶催化放大的CL信号,提高了分析灵敏度。该方法首次应用于溴布特罗的检测,具有重要意义,为其他小分子分析提供了新思路,且丰富了基于纳米粒子标记的化学发光免疫分析应用。
【关键词】：流动注射 化学发光免疫分析 免疫传感器 酶放大 沙丁胺醇 二氧化硅 溴布特罗
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.3
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-10
• 第一章 绪论10-24
• 1.1 引言10
• 1.2 流动注射技术10-11
• 1.3 化学发光11-15
• 1.3.1 化学发光反应的基本原理11-12
• 1.3.2 化学发光反应体系12-15
• 1.4 免疫分析15-17
• 1.4.1 免疫分析的原理15-16
• 1.4.2 免疫分析模式的类型16-17
• 1.5 化学发光免疫分析17
• 1.6 免疫反应器制备技术17-18
• 1.6.1 聚苯乙烯微球作为固相载体17-18
• 1.6.2 免疫磁球(IMB)作为固相载体18
• 1.7 展望18-19
• 1.8 本论文的研究目的、意义和创新点19
• 1.8.1 研究目的19
• 1.8.2 意义与创新点19
• 参考文献19-24
• 第二章 基于羧基化树脂珠和酶放大的流动注射化学发光竞争免疫分析 β-受体激动剂沙丁胺醇24-39
• 2.1 引言24-25
• 2.2 实验部分25-29
• 2.2.1 试剂25-26
• 2.2.2 实验所用溶液的配制26
• 2.2.3 仪器与设备26-27
• 2.2.4 沙丁胺醇抗原和抗体的合成27
• 2.2.5 化学发光免疫传感器的制备27-28
• 2.2.6 分析过程28-29
• 2.3 结果与讨论29-34
• 2.3.1 羧基树脂珠的表征29
• 2.3.2 化学发光反应的动力学表征29-30
• 2.3.3 化学发光检测条件的优化30
• 2.3.4 免疫分析过程的优化30-32
• 2.3.5 流动注射化学发光竞争免疫分析沙丁胺醇标准曲线的建立32-33
• 2.3.6 免疫传感器的再生，，重现性和稳定性考察33-34
• 2.3.7 实际样品分析34
• 2.4 结论34-35
• 参考文献35-39
• 第三章 基于纳米粒子的化学发光信号放大策略研究39-50
• 3.1 引言39-41
• 3.2 实验部分41-43
• 3.2.1 实验试剂41
• 3.2.2 实验所用溶液的配制41
• 3.2.3 实验仪器41
• 3.2.4 鲁米诺功能化的银纳米粒子（鲁米诺-AgNPs）的制备41-42
• 3.2.5 二氧化硅纳米粒子的制备和表面修饰42
• 3.2.6 HRP-SiO_2-Ab复合物的制备42-43
• 3.3 结果与讨论43-44
• 3.3.1 鲁米诺-AgNPs的表征43
• 3.3.2 二氧化硅纳米粒子的表征43-44
• 3.3.3 表面有功能基团改性的二氧化硅纳米粒子的表征44
• 3.4 检测鲁米诺-AgNPs对CL的放大效果44-45
• 3.5 检测HRP-SiO_2-Ab对CL的放大效果45-46
• 3.6 结论46
• 参考文献46-50
• 第四章 基于HRP功能化的二氧化硅纳米粒子作为信号放大的流动注射化学发光免疫分析溴布特罗50-60
• 4.1 引言50-52
• 4.2 实验部分52-55
• 4.2.1 实验试剂52-53
• 4.2.2 仪器53
• 4.2.3 溴布特罗包被抗原和抗体的制备53
• 4.2.4 免疫传感器的制备及其检测53-55
• 4.3 结果与讨论55-57
• 4.3.1 羧基树脂珠的表征55
• 4.3.2 实验条件的优化55-57
• 4.4 结论57-58
• 参考文献58-60
• 攻读硕士学位期间发表和待发表的论文60-61
• 致谢61-62

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本文编号：876751