脂肪前体细胞褐色分化的小分子探针
本文关键词：脂肪前体细胞褐色分化的小分子探针
【摘要】：脂肪组织肥大是肥胖症的明显症状之一,而脂肪组织一般可区分为白色脂肪组织(WAT)、褐色脂肪组织(BAT)和米色脂肪组织(Beige AT)。在超重和肥胖人群中观察到褐色脂肪组织的数量明显减少。近年来通过微小核糖核酸(miRNA)等对增强褐色脂肪组织在体内的功能或促使脂肪细胞的褐色化被认为是治疗肥胖症的一条可能途径。而在肌肉组织中富集的miRNA如miR-133已被发现与脂肪细胞分化方向的调控密切相关。本论文工作基于我们前期研究中已发现的一个能够选择性抑制miR-133的活性分子骨架,开展了活性小分子探针的构筑和探针分子对脂肪前体细胞褐色分化调节的活性及相关机制研究。论文工作第一部分首先将通过光化学反应获取的一对非对映立体异构体上衍生出了能够发生点击反应的端炔官能团与能够发生光交联的双吖丙啶官能团以构建可用于靶点确认的化学生物学探针分子,经衍生化后的这对非对映立体异构体可被分别分离纯化,并且在调控C2C12细胞中的miR-133的活性中表现出了非常显著的差异,我们发现了其中对miR-133表达抑制活性高的分子c9-endo和c10-endo。在论文第二部分的工作中对探针分子c9-endo和c10-endo作用于脂肪前体细胞后诱导分化的表型变化及细胞内相应的分化相关基因表达被探针分子调控的情况进行了研究,发现PRDM16的mRNA水平被上调,米色脂肪选择性的基因Tmem26、CD137、Tbx1的mRNA水平被上调的现象。对于活性分子的作用机制,论文在最后一部分工作中进行了探索,基于探针分子中的端炔官能团,我们通过改变作用底物分子的投料比率、铜催化剂用量、配体比例及反应的酸碱性等条件找到了可与带有叠氮官能团的生物素发生高效点击反应的良好条件,以用于活性分子在细胞中作用的结合靶标的进一步富集和鉴定。
【关键词】：
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q25;O657.3
【目录】：
- 中文摘要5-6
- Abstract6-8
- 第一章 绪论8-23
- 1.1 化学生物学的小分子探针8-11
- 1.2 肥胖相关疾病治疗与脂肪褐色化11-15
- 1.3 以合成小分子、天然产物、重组蛋白为调控工具对脂肪及代谢的研究15-16
- 1.4 微小核糖核酸(miRNA)对脂肪褐色化的调控16-19
- 1.5 立题依据19-20
- 参考文献20-23
- 第二章 小分子探针的构筑23-44
- 引言23-25
- 结果与讨论25-33
- 2.1 小分子探针片段a的合成25-26
- 2.2 小分子探针光交联片段b的合成26-28
- 2.3 小分子探针的构筑28-33
- 本章小结33-43
- 2.4 实验部分34-43
- 2.4.1 仪器与试剂34-35
- 2.4.2 实验步骤35-38
- 2.4.3 化合物表征38-43
- 参考文献43-44
- 第三章 小分子探针作用下的脂肪前体细胞的褐色分化探究44-74
- 引言44-50
- 结果与讨论50-64
- 3.1 小分子探针的生物活性验证50-51
- 3.2 3T3-L1模型与SVF模型的建立51-55
- 3.3 小分子探针促进白色脂肪前体细胞褐色化发展的活性评估55-64
- 本章小结64-71
- 3.4 实验部分65-71
- 3.4.1 仪器65
- 3.4.2 实验指南65-71
- 参考文献71-74
- 第四章 小分子探针的Click反应74-93
- 引言74-79
- 结果与讨论79-89
- 4.1 小分子探针Click反应性的优化79-87
- 4.2 基于Click反应的小分子探针作用机制探索87-89
- 本章小结89-91
- 4.3 实验部分89-91
- 4.3.1 仪器与试剂89-90
- 4.3.2 实验指南90-91
- 参考文献91-93
- 附录93-107
- 硕士期间发表论文107-108
- 致谢108-111
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