三聚氰胺致NRK细胞氧化损伤及其凋亡通路的研究

发布时间：2016-12-17 05:03

本文关键词：基于计算机视觉和光谱分析技术的蔬菜叶部病害诊断研究，由笔耕文化传播整理发布。

《湖南农业大学》 2012年

魏强

【摘要】：目的：研究三聚氰胺对NRK细胞的毒性作用及其作用机制,从而为三聚氰胺的肾毒性作用机理作一补充。方法：用37℃预热的DMEM培养基溶解三聚氰胺,经过稀释得到3mg/ml,2.5mg/ml,2mg/ml,1.5mg/ml,1.0mg/ml,0.5mg/ml,0mg/ml共7个浓度组,用MTT法检测不同浓度梯度的三聚氰胺对NRK细胞增殖的影响。根据不同浓度的三聚氰胺对NRK细胞增殖率的影响,选择0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml和3mg/ml共4个三聚氰胺浓度组用于后续的实验。然后用Hoechst33342染液检测凋亡的NRK细胞的形态。通过检测SOD、MDA、GSH-Px的含量了解三聚氰胺对NRK细胞的氧化损伤程度。流式细胞仪定量检测不同浓度三聚氰胺染毒的NRK细胞的凋亡率和Ac-LEHD-FMK对细胞凋亡的作用。用罗丹明123检测线粒体膜电位。用Western Blot检测caspase3和caspase9蛋白的表达水平。结果：与Omg/ml的三聚氰胺空白组相比,0.5mg/ml,1.0mg/ml,1.5mg/ml,2.0mg/ml,2.5mg/ml,3mg/ml的三聚氰胺浓度组的NRK细胞的存活力下降,并且随着三聚氰胺浓度的升高,细胞的抑制率逐渐上升。应用Hoechst33342染液检测NRK细胞的形态学发现,凋亡的NRK细胞呈亮蓝色,正常NRK细胞呈现低蓝色。在检测NRK细胞的氧化指标中发现,与空白组相比,经过1mg/ml,2mg/ml和3mg/ml的三聚氰胺处理的NRK细胞中的SOD和GSH-Px含量下降,MDA含量上升,随着三聚氰胺浓度的升高,SOD和GSH-Px含量逐渐降低,而MDA的含量逐渐升高,呈现浓度依赖性效应。经过流式细胞术检测三聚氰胺对NRK细胞的凋亡影响发现,与空白组相比,1mg/ml,2mg/ml和3mg/ml的三聚氰胺浓度组的NRK细胞的凋亡率上升；但是经过Ac-LEHD-FMK预处理的1mg/ml的三聚氰胺浓度组与1mg/ml的三聚氰胺浓度组相比,NRK细胞的凋亡率下降,并且正常细胞的数量与Omg/ml的三聚氰胺空白组接近,这说明Ac-LEHD-FMK能抑制三聚氰胺诱导的NRK细胞凋亡。三聚氰胺染毒组与对照组相比,NRK细胞的线粒体膜电位降低,并且呈现浓度依赖性效应。经过lmg/ml,2mg/ml和3mg/ml的三聚氰胺处理的NRK细胞中的caspase9前体蛋白和caspase3前体蛋白的表达量下降,caspase9活化蛋白和caspase3活化蛋白的表达量上升,并且这种变化随着三聚氰胺浓度的升高而加大,呈现浓度依赖效应。结论：三聚氰胺抑制NRK细胞的增殖,造成氧化损伤,并诱导NRK细胞以线粒体通路凋亡

【关键词】：
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：S859.8
【目录】：

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