HBx通过激活IL-6/STAT3通路诱导干性基因的表达及其对肝癌细胞恶性行为的影响

发布时间：2021-11-28 19:34

　　目的:乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染是肝癌发生的重要危险因素,但其如何导致肝癌发生尚不清楚,目前认为由乙型肝炎病毒X基因编码的蛋白（HBx）在其中起着关键作用。当慢性乙型肝炎患者病情急性加重时,白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）水平上升,激活下游相关信号通路,促进肝癌的发生发展。其中IL-6/STAT3信号通路至关重要,其异常激活能促进卵巢癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中某些干性基因的表达,但其是否促进肝癌发展的机制尚不明确。本研究拟通过探索HBx对IL-6/STAT3通路的调控作用,及其二者与干性基因表达之间的关系,证明IL-6是驱动乙型肝炎病毒相关性肝癌的内在细胞因子,为今后靶向IL-6治疗肝癌提供理论依据。方法:将携带HBx基因的慢病毒感染肝癌细胞HLE,以获得稳定表达HBx的HLE细胞（HLE-HBx）。以HLE细胞作为对照,分别使用PCR、Western Blot、MTT、Transwell和细胞划痕实验检测HLE-HBx中HBx和IL-6的表达丰度、IL-6、IL-6R、STAT3和p-STAT3蛋白水平、对5-氟尿... 

【文章来源】：海南医学院海南省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HLE-HBx细胞株的建立GAPDH

HBx 对肝癌细胞恶性行为的影响1 HBx 促进肝癌细胞的耐药性为了验证 HBx 对肝癌细胞耐药性的影响，我们选用了一种常用的经典 5-氟尿嘧啶（5-FU），将 5-FU 稀释为不同浓度（0、40、80、160、3 μmol/L），作用 HLE 细胞 24 h 后，根据 MTT 比色法测定的 OD 值绘度 5-FU 对肝癌细胞 HLE 的生长的影响的柱状图，结果如图 3.2 所示的 5-FU 对 HLE 肝癌细胞的增殖均有一定的抑制作用，在 5-FU 浓度为ol/L 和 640 μmol/L 时，HLE 细胞的增值率低于 50%；然后用 320 μmo μmol/L 5-FU 比较 HLE、HLE-GFP、HLE-HBx 三种细胞的生长抑制情如图 3.3 所示，用这两种浓度 5-FU 处理细胞，HLE-HBx 细胞的生长抑显低于与 HLE、HLE-GFP，这说明 HBx 促进肝癌细胞 HLE 耐药。

图 3.3 比较 5-FU 作用下 HLE-HBx 生长抑制率的ol/L 5-FU 作用三种细胞 24 h 后，在波长 490 nm 处测得吸光值细胞 24 h 后,在波长 490 nm 处测得吸光值。纵坐标为细胞生长%）=（正常组吸光值-加药细胞组吸光值)/正常组吸光值×100%，与 HLE 和 HLE-GFP 相比，** P＜0.01。进肝癌细胞的迁移 Transwell 实验和细胞划痕实验两种方法来验证 HB移性的影响，用 HLE、HLE-GFP 和 HLE-HBx 三种细胞果如图 3.4A 所示，较 HLE 和 HLE-GFP，过表达 HB细胞数明显多于对照组，其迁移能力也高于其他两组 HLE-HBx 三种细胞进行细胞划痕实验，结果如图 3.4E 细胞的迁移性明显高于 HLE 和 HLE-GFP，72 h 的愈

【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌危险因素及早期诊断与筛查[J]. 李鹏,丁惠国.  中国实用内科杂志. 2015(03)
[2]HBx蛋白生物学作用的研究进展[J]. 龚倩,何松.  世界华人消化杂志. 2010(34)



本文编号：3525020