LncRNA MEG3胞内结合蛋白的亲和纯化与下游靶基因的筛选

发布时间：2021-12-09 18:50

　　背景:乳腺癌是导致女性死亡的主要恶性肿瘤,原因在于缺乏专一而有效的治疗靶点,因而寻找特异的治疗靶点是乳腺癌研究中的一大难题。lncRNAs是一组不编码蛋白质的转录体,长度大于200个核苷酸,lncRNA在细胞周期和分化调控等众多生命活动中发挥重要作用,如调控细胞结构的完整性,控制的亚细胞定位,和表观遗传修饰等。长链非编码RNA功能的发挥通常依赖于互作蛋白,如lncRNA TERRA就是通过与hnRNPA1互作,实现细胞的永生化。lncRNA MEG3（Maternally Expressed Gene3）是一种母系遗传的印记基因,位于人类染色体14q32,在人体多种正常组织中表达,在脑和垂体高表达,而在非小细胞肺癌和乳腺癌等肿瘤细胞中不表达或低表达,在癌细胞系如HeLa,H4和CH157-MN中重新表达MEG3,均可抑制细胞增殖。此外MEG3能够促进肿瘤抑制基因p53蛋白表达水平,增强p53与其靶基因启动子的结合。MEG3可通过刺激p53依赖的转录在体外和体内诱导细胞凋亡。近年来在肺癌细胞中有研究者运用ChIRP技术检测到MEG3可以招募PRC2复合体的组件JARID2及其靶基因,形成... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MEG3的亚细胞定位（FISH:红色荧光探针标记MEG3RNA；DAPI：蓝色荧光染料标记细胞核轮廓；Merge：将前两张荧光图合并到一起，定位RNA的位置）

纯化体系示意图（ Flp-in system:DOX 诱导基因过表达系统，实现 MEG3 在 定过表达；DOX：强力霉素；NE：细胞核提取物；CE：细胞质提取物；M蛋白；MBP：麦芽糖结合蛋白；Amylose beads：直链淀粉磁珠；RNP：RN

图 3 Lenti-X Tet-On 3G 诱导表达系统作用流程图（Plvx-TRE3G：插入目的基因的质粒；Plvx-TRE3G：携带调控子，调控基因的诱导过表达；VSVG：病毒包装体系；puro：嘌呤霉素；G418：遗传霉素）


本文编号：3531130