重组质粒介导的RNAi沉默CEMIP基因表达对人结直肠肿瘤形成潜能的分子机制研究

发布时间：2021-12-18 03:46

　　结直肠癌已成为国内外最常见的恶性肿瘤之一,多种复杂的分子机制参与直肠癌的发生发展,导致其缺少有效的靶向药物和新的生物标志物,近年来细胞迁移诱导的透明质酸结合蛋白(CEMIP)在多种恶性肿瘤细胞中均被证实异常高表达且参与细胞的生长和转移,CEMIP在结直肠癌中虽有多项研究报道,但其作用机制仍未有明确的定论,因此本课题假设CEMIP通过多条信号通路调控结直肠癌细胞的生物学行为,为证明该假设我们拟通过构建CEMIP下调的稳定转染细胞系,分别从分子水平和蛋白水平初步揭示CEMIP介导EMT信号通路和内质网应激相关通路调控结肠癌细胞的生物学行为,进一步通过构建荷瘤小鼠模型验证以上结论,再次明确CEMIP的作用机制和调控通路。我们的研究能够为深入了解结直肠癌的疾病进展机制和发现新的生物标志物提供理论依据。

【文章来源】： 吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【文章目录】：
内容提要
中文摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 前言
    1.2 综述
        1.2.1 结直肠癌的研究进展
        1.2.2 CEMIP分子结构和功能
        1.2.3 CEMIP信号转导与调控
        1.2.4 CEMIP与肿瘤
        1.2.5 总结
第2章 CEMIP在结直肠癌Wnt/β-catenin/Snail信号通路及上皮间充质化转化(EMT)中的作用
    2.1 材料与方法
        2.1.1 细胞系和细胞培养
        2.1.2 常规试剂和耗材
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验步骤
        2.2.1 细胞传代
        2.2.2 质粒构建和转染
        2.2.3 MTT增殖试验
        2.2.4 划痕试验
        2.2.5 Transwell侵袭实验
        2.2.6 荧光定量PCR
        2.2.7 Westernblot
        2.2.8 免疫荧光染色
        2.2.9 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 在结直肠癌细胞系HCT116和SW480中构建CEMIP降表达的稳定细胞株
        2.3.2 沉默CEMIP后结直肠癌HCT116和SW480细胞的增殖能力受到抑制
        2.3.3 CEMIPshRNA减弱了结直肠癌HCT116和SW480细胞的迁移能力
        2.3.4 CEMIPshRNA抑制了结直肠癌HCT116和SW480细胞的体外侵袭能力
        2.3.5 CEMIPshRNA抑制了结直肠癌HCT116和SW480细胞EMT的转换进程
        2.3.6 沉默CEMIP能够抑制结直肠癌HCT116和SW480细胞中间质标志物的表达但上调上皮细胞标志物的表达
        2.3.7 CEMIPshRNA能够抑制结直肠癌HCT116和SW480细胞中的Wnt/β-catenin/Snail信号通路
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 CEMIP对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及在内质网应激中的作用机制研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 细胞系和细胞培养
        3.1.2 常规试剂和耗材
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验步骤
        3.2.1 细胞传代培养
        3.2.2 MTT检测
        3.2.3 克隆形成试验
        3.2.4 细胞周期
        3.2.5 Westernblot
        3.2.6 构建动物模型
        3.2.7 HE染色
        3.2.8 TUNEL细胞凋亡检测
        3.2.9 免疫组织化学染色
        3.2.10 细胞凋亡试验
        3.2.11 qRT-PCR
    3.3 结果
        3.3.1 CEMIPshRNA-1和shRNA-2抑制结直肠癌细胞中内源性CEMIP的表达
        3.3.2 沉默CEMIP后结肠癌细胞的增殖能力受损
        3.3.3 CEMIPshRNA抑制结肠癌细胞的克隆形成
        3.3.4 CEMIPshRNA诱导结肠癌细胞周期阻滞在G1期
        3.3.5 下调CEMIP能够抑制移植瘤小鼠的肿瘤生长
        3.3.6 下调CEMIP能够诱导移植瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡
        3.3.7 沉默CEMIP后的移植瘤小鼠肿瘤细胞中CEMIP表达降低.
        3.3.8 沉默CEMIP降低了移植瘤小鼠肿瘤细胞中GRP78蛋白的表达水平
        3.3.9 CEMIPshRNA诱导了结直肠癌细胞的凋亡表达
        3.3.10 CEMIPshRNA下调了未折叠蛋白反应(unfoldedproteinresponse,UPR)相关蛋白的表达
        3.3.11 CEMIPshRNA促进了TG-诱导的细胞凋亡
        3.3.12 CEMIPshRNA增加了TG-诱导的细胞凋亡蛋白的表达
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 结论
参考文献
作者简介及已在学期间取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌的癌前病变筛查[J]. 黄力文,王善娟,梁妙茵,冯典希,吴国昌,许舒宁,方圆,黄至生.  中华流行病学杂志. 2017 (10)
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[3]结直肠癌筛查现状 [J]. 李聪.  广东医学. 2016(22)
[4]Single-incision laparoscopic colorectal surgery for cancer: State of art [J]. Fabio Cianchi,Fabio Staderini,Benedetta Badii.  World Journal of Gastroenterology. 2014(20)
[5]Anti-EGFR and anti-VEGF agents:Important targeted therapies of colorectal liver metastases [J]. Qing-Yang Feng,Ye Wei,Jing-Wen Chen,Wen-Ju Chang,Le-Chi Ye,De-Xiang Zhu,Jian-Min Xu.  World Journal of Gastroenterology. 2014(15)
[6]KIAA1199基因的研究进展 [J]. 冯立,董培德,苏秀兰,贾淑芹.  内蒙古医学院学报. 2010(S3)



本文编号：3541566