钟基因和骨骼肌细胞分化的关系

发布时间：2021-12-22 17:06

　　目的:昼夜节律广泛存在于所有的哺乳动物,生物钟是调控该节律的内源性起搏点。核心钟基因主要包括Bmal1、Clock、Per、Cry、Rev-erbα和RORα,并形成复杂的调控环路,协同参与形成周期性节律。骨骼肌具有昼夜节律,核心钟基因和肌调节因子参与调节骨骼肌的发育成熟,但其具体机制有待进一步研究证实。昼夜节律紊乱和众多疾病相关,如癌症,尤其是恶液质的晚期癌症患者会出现脂肪组织和骨骼肌不断分解消耗,持续体重下降并伴发有炎症反应。炎性刺激条件下钟基因和骨骼肌萎缩之间的关系也尚不清楚。本研究拟用RT-PCR和Western blot等方法观察核心钟基因在不同胎龄小鼠胚胎和C2C12成肌细胞诱导分化过程中的时空表达特点,分析骨骼肌发育分化过程中Bmal1、Clock和肌调节因子之间的关系;观察LPS炎性刺激对C2C12成肌细胞诱导分化过程中钟基因和骨骼肌发育分化相关基因的影响,阐明炎性刺激抑制肌管融合可能的机制。方法:1.收集胎龄10¹7d ICR小鼠全胚胎和C2C12成肌细胞诱导分化不同时间细胞的RNA,反转录cDNA为模板,定量RT-PCR分析5个核心钟基因Bma...

【文章来源】： 山西医科大学山西省

【文章页数】：59 页

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表(Abbreviation)
缩写名词附表
前言
第一部分 钟基因Bmal1、Clock参与调节骨骼肌的发育分化
    1 实验材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 主要试剂的配制
        2.2 动物饲养及取材
        2.3 细胞的培养与诱导分化
        2.4 总RNA的提取纯化、反转录和分析
        2.5 细胞转染及结果分析
        2.6 细胞总蛋白的提取、Western blot分析
        2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 核心钟基因在不同胎龄小鼠胚胎的表达
        3.2 肌调节因子MyoD和 myogenin在不同胎龄小鼠胚胎的表达
        3.3 核心钟基因在C2C12 成肌细胞诱导分化过程中的表达
        3.4 肌调节因子MyoD和 myogenin在 C2C12 成肌细胞诱导分化过程中的表达
        3.5 C2C12 成肌细胞诱导分化过程中,BMAL1、CLOCK和 MYOD蛋白的表达变化
    4 讨论
        4.1 小鼠胚胎发育过程中,核心钟基因参与骨骼肌的发育分化
        4.2 核心钟基因参与C2C12 成肌细胞分化
        4.3 钟基因Bmal1、Clock与肌调节因子MyoD之间的关系
第二部分 LPS炎性刺激对C2C12 成肌细胞分化的影响
    1 实验材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 主要试剂的配制
        2.2 细胞诱导分化与实验分组
        2.3 总RNA的提取纯化、反转录和分析
        2.4 细胞总蛋白的提取、Western blot 分析
        2.5 图像采集
    3 结果
        3.1 LPS炎性刺激对C2C12 成肌细胞诱导分化的影响
        3.2 LPS炎性刺激对C2C12 成肌细胞分化过程中骨骼肌发育分化相关基因的表达影响
        3.3 LPS炎性刺激对C2C12 成肌细胞分化过程中钟基因的表达影响
    4 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]钟基因在不同胎龄小鼠胚胎和孕鼠的表达规律 [J]. 闫银弟,罗旭光,杨艳萍,李海荣,崔慧林,曹锡梅.  中国组织工程研究. 2019(01)
[2]骨骼肌昼夜节律分子钟机制的研究进展 [J]. 闫银弟,罗旭光,杨艳萍,李海荣,曹锡梅.  实用医学杂志. 2018(07)
[3]哺乳动物生物钟的遗传和表观遗传研究进展 [J]. 岳敏,杨禹,郭改丽,秦曦明.  遗传. 2017(12)



本文编号：3546760