小鼠视网膜内Spata7基因敲除模型构建及其光感受器细胞凋亡机制的研究

发布时间：2021-12-28 20:22

　　目的构建小鼠Spata7基因视网膜内敲除模型,探讨Spata7基因突变导致光感受器细胞凋亡的机制。方法以腺相关病毒（AAV）为载体搭载CRISPR/Cas9系统,注射1μL AAV病毒混合液（3×1013 vg/mL）于出生14 d小鼠视网膜中,对Spata7基因进行视网膜内特异性敲除。1个月后行视网膜眼底照相观察AAV感染效率;定量PCR测定敲除效率;视觉电生理检测光感受器细胞功能;免疫荧光实验探究Spata7基因功能。结果 AAV有效搭载CRISPR/Cas9系统进入视网膜内并对Spata7基因进行敲除,敲除效率为54%。小鼠光感受器细胞大量死亡,导致整体光感受器细胞功能明显下降。敲除后,视紫红质无法被转运到光感受器细胞外节,引起明显的内质网应激。结论 Spata7基因敲除导致视紫红质蛋白运输到外节受阻而停留在内质网,并造成内质网应激,是导致光感受器细胞大量死亡的重要原因。 

【文章来源】：中国医科大学学报. 2020,49(12)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

视网膜下腔注射1个月后实验组小鼠眼底照相检查结果

GFP与Cas9蛋白的免疫荧光染色结果

图4 GFP与Cas9蛋白的免疫荧光染色结果本研究对Spata7基因视网膜内敲除1个月后光感受器细胞的死亡机制进行了探讨。结果显示，RHO在实验组小鼠AAV注射眼光感受器细胞内节中呈高表达，提示RHO滞留在光感受器细胞ER内。ER应激标记蛋白CHOP在小鼠AAV注射眼光感受器细胞内节中高表达，意味着RHO在ER内的聚集引发了ER应激。说明视网膜内敲除Spata7基因后，RHO不能被转运到光感受器细胞外节，而停留在了ER，造成了ER应激，导致光感受器细胞凋亡。


本文编号：3554669