绿色荧光蛋白基因克隆及其表达培养基的筛选

发布时间：2022-01-01 23:37

　　为应用PET15b-GFP观察细胞内部结构等功能奠定基础,研究绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）的基因克隆及其在不同种培养基条件下不同种感受态大肠杆菌细胞中的表达状况,通过克隆提纯PET15b-GFP质粒,将已插入单链抗体3E3和152的重组质粒pET15b-3E3-GFP和pET15b-152-GFP,运用转化的方法将重组质粒分别导入感受态的大肠杆菌细胞中（BL21,B cell,K12）,在不同培养条件下使用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导GFP基因进行表达,筛选出表达最好的并改良表达能力最弱表达条件。结果表明:重组质粒pET15b-152GFP-BL21在液态LB培养基中30℃、0.4mmol/L IPTG、180r/min诱导条件下培养显色最显著,在固态富集酵母培养基中30℃,1mmol/L诱导条件下培养显色最显著;表达能力最弱的重组质粒pET15b-152-GFP-B cell在富集酵母液体培养基中25℃、180r/min、0.4mmol/L IPTG的条件下诱导培养表达绿色荧光最显著;pET15b-152-GFP-B cell在0 ... 

【文章来源】：贵州农业科学. 2020,48(09)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

GFP质粒提纯琼脂糖电泳结果

3）不同浓度IPTG诱导条件下绿色荧光显色情况。从图6看出，在富集酵母液体培养基中分别加入0mmol/L、0.1mmol/L、0.4mmol/L、1mmol/L IPTG,30℃诱导条件下，pET15b-152GFP-Bcell在绿色荧光蛋白均能表达绿色荧光，且不同浓度处理间无显著差异。图4 30℃和25℃pET15b-152GFP-B cell在各固态培养基中的表达

30℃和25℃pET15b-152GFP-B cell在各固态培养基中的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]双启动子双报告基因真核表达质粒的构建及鉴定[J]. 崔力沙,崔博沛,陈磊,吴星,梁争论,徐艳玲,李克雷.  中国生物制品学杂志. 2020(07)
[2]灵菌红素缩合酶PigC在大肠杆菌中表达条件优化[J]. 李景璇,梅晓彤,章龙缨,戚展红,尤忠毓.  基因组学与应用生物学. 2018(10)
[3]人B7-2和增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建[J]. 路静,杨洪艳,赵军,黄幼田,赵国强,董子明.  山东医药. 2005(07)
[4]微生物转化过程中利用OD值实时监测细菌生物量变化的研究[J]. 李学贵,袁生.  南京师大学报(自然科学版). 2003(04)
[5]绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的克隆及高效表达[J]. 陆惠萍,周凤娟,孙树汉.  第二军医大学学报. 1997(05)

硕士论文
[1]绿色荧光蛋白标记的非抗性示踪载体的构建及初步应用[D]. 张云龙.吉林农业大学 2007



本文编号：3563048