利用CRISPR/Cas9系统高效敲除斑马鱼lncRNA基因启动子区

发布时间：2022-01-02 08:00

　　斑马鱼（Danio rerio）长非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）基因Nondret002679与人（Homo sapiens）肿瘤相关基因间长非编码RNA682基因LNC-PHOX2B-2具有同源序列。本研究以斑马鱼为模型,利用成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律间隔短回文重复序列关联蛋白9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9）系统,敲除预测的Nondret002679基因启动子区以沉默Nondret002679基因的表达,研究lnc RNA基因Nondret002679在斑马鱼中的调控功能。首先利用启动子区上下游序列设计靶向不同位点的向导RNA（guide RNA）g R1、g R2、g R3、g R4、g R5和g R6。人工合成g RNA转录模板,体外转录为g RNA,与Cas9 m RNA一起显微注射到斑马鱼卵中。PCR鉴定28尾2月龄斑马鱼发现,11尾发生敲除,敲除率为39%。繁... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2016,24(05)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 靶位点的选择
        1.2.2 g RNA转录模板合成
        1.2.3 Cas9 m RNA的体外转录
        1.2.4 g RNA体外转录
        1.2.5 显微注射及敲除检测
        1.2.6 纯合lnc RNA启动子区敲除鉴定
2 结果与分析
    2.1 早期斑马鱼敲除结果鉴定
    2.2 2月龄斑马鱼敲除结果鉴定
    2.3 纯合lnc RNA启动子区敲除的获得
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas技术研究进展[J]. 常振仪,严维,刘东风,陈竹锋,谢刚,卢嘉威,吴建新,唐晓艳.  农业生物技术学报. 2015(09)



本文编号：3563807