GLUT1启动子荧光素酶报告基因系统的构建及鉴定

发布时间：2022-01-07 18:38

　　目的克隆并构建葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）启动子的荧光素酶报告基因载体并检测其活性。方法以ZR75-1细胞提取的基因组为模板进行PCR扩增,将获得的GLUT1启动子片段酶切后连接至荧光素酶报告载体pGL4-basic中,重组质粒pGL4-basic-GLUT1经测序正确后与空载体分别转染293T细胞,并检测启动子活性;再将pGL4-basic-GLUT1同myc-HIF1α或对照质粒pXJ-40-myc转染ZR75-1细胞,分别在高糖和低糖条件下培养,检测启动子活性,探讨低氧诱导因子1α（HIF1α）对GLUT1启动子活性的影响。结果 DNA测序显示,扩增片段与GLUT1启动子片段的序列一致。荧光素酶活性实验显示,转染pGL4-basic-GLUT1后,GLUT1启动子较对照组有较高活性（P<0.001）;低糖条件下,pGL4-basic-GLUT1与myc-HIF1α共转染,GLUT1启动子活性更强（P=0.042）。结论成功构建了GLUT1启动子报告基因载体,明确了HIF1α在高糖和低糖条件下对GLUT1启动子活性的增强作用,为深入研究GLUT1在肿瘤细胞代谢中的作用奠定了... 

【文章来源】：军事医学. 2020,44(07)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

PCR扩增人GLUT1启动子序列

重组质粒的双酶切鉴定

为观察HIF1α对GLUTI启动子转录活性的作用，分别在高糖和低糖条件下培养ZR75-1细胞，测定GLUT1启动子转录活性。经三因素方差分析，转染质粒pGL4-basic-GLUT1、myc-HIF1α以及低葡萄糖浓度均可促进启动子活性（P<0.001），且pGL4-basic-GLUT1与myc-HIF1α、pGL4-basic-GLUT1与葡萄糖浓度之间均存在一阶交互作用（P<0.001),pGL4-basic-GLUT1、myc-HIF1α与葡萄糖浓度三者之间存在二阶交互作用（P=0.042），按α=0.05水准，可认为myc-HIF1α能明显促进pGL4-basic-GLUT1的作用，增强启动子活性，低葡萄糖浓度亦如此；在低糖浓度下，myc-HIF1α与pGL4-basic-GLUT1共转染，GLUT1启动子活性更强（图4）。图4 HIF1α增强GLUT1启动子活性（n=3)

【参考文献】：
期刊论文
[1]缺氧诱导因子1α在肝纤维化发生发展中的作用机制[J]. 周丹,张立婷,李俊峰,王珊,肖萍.  临床肝胆病杂志. 2019(07)
[2]缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子在子宫内膜癌中的表达及临床意义[J]. 孙文惠子,Dhruba Paudel,欧阳一芹,宋思蕊,童晓文,李怀芳,王建军,初磊.  第二军医大学学报. 2019(04)
[3]易化型葡萄糖转运体的表达、分布及相关疾病的研究进展[J]. 魏兰兰,任煦,赵妍妍,王莉,赵玉峰.  生理学报. 2019(02)



本文编号：3575058