人Testin基因过表达慢病毒载体的构建及修饰人胎盘间充质干细胞的研究

发布时间：2022-01-11 11:15

　　目的成功构建Testin基因重组慢病毒过表达载体,检测其转染人胚肾上皮细胞系293T的表达情况,并将其修饰人胎盘间充质干细胞（h PMSCs）,构建稳定表达Testin蛋白的h PMSCs细胞株。方法将聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因Testin插入慢病毒载体p HBLVCMVIE-Zs Green-Puro中,构建慢病毒表达质粒p HBLV-Testin并转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;经PCR、DNA测序和比对分析后,用Lipofiter TM脂质体将重组慢病毒表达载体p HBLV-Testin和辅助包装质（p SPAX2,p MD2G）共转染293T细胞包装成重组慢病毒颗粒,浓缩上清并测定病毒滴度。将成功包装的Testin过表达慢病毒载体（p HBLV-Testin）转染293T,用蛋白质印迹法（Western Blot）检测Testin蛋白的表达情况。用p HBLV-Testin重组慢病毒载体转染h PMSCs细胞并确定最佳感染复数（MOI）,经western blot检测相关蛋白表达,经CCK-8检测感染的h PMSCs细胞增殖活性,以空载体组（p HBLV-null）及无... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

目的基因Testin的PCR扩增产物凝胶电泳分析

27图 2 pHBLV-Testin 阳性克隆 PCR 鉴定琼脂糖凝胶电泳图：DNAMarkerLane 1-8：TES 单克隆鉴定 PCR 产物均可见长度为 1 266 bp 左右基因与目的基因 Testin 大小基本一致。

PCR鉴定正确的TES基因测序峰图及BLAST软件分析结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3582684