优雅蝈螽Myosin 18a基因克隆及其在顶体发生中的作用分析

发布时间：2022-01-12 10:08

　　优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa Brunner von Wattenwyl是直翅目Orthoptera重要的模式昆虫,易于饲养和取材,其精子形成过程已研究的较为清楚,这为探究肌球蛋白在优雅蝈螽顶体发生过程中的作用提供了条件。对于传统的模式动物,例如果蝇顶体发生过程已经有一些研究,但是对于直翅目昆虫而言,果蝇顶体发生的模型无法解决直翅目昆虫顶体发生过程中的一些问题,因此,探究优雅蝈螽顶体发生过程对于直翅目昆虫的研究提供了一个良好的参考,也为后续深入研究奠定基础。本实验室前期将优雅蝈螽成虫交给华大科技,使用Illumina Hiseq平台测得雌雄成体转录组数据,以此为依据建立了优雅蝈螽转录组数据库。本研究从优雅蝈螽成体转录组数据库中检索肌球蛋白基因序列,检索到的基因在NCBI上进行比对。根据比对结果,确定了GgMyo18a基因。结合优雅蝈螽差异转录组数据和GgMyo18a不同组织中表达量分析,本研究发现GgMyo18a基因在优雅蝈螽精巢中的表达量明显高于其他组织,推测Myosin 18A蛋白在优雅蝈螽顶体发生过程中发挥作用。本研究首先扩增了GgMyo18a基因,对扩增得到... 

【文章来源】：河北大学河北省

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【学位级别】：硕士

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Myosin18A蛋白与其他物种氨基酸序列比对Fig.2-3MultiplealignmentofaminoacidsequenceofMyosin18Awithotherspecies

河北大学硕士学位论文20图2-3Myosin18A蛋白与其他物种氨基酸序列比对（续）Fig.2-3MultiplealignmentofaminoacidsequenceofMyosin18Awithotherspecies(Continued)黄色区域所示为KE-rich序列，绿色区域所示为PDZ结构域，浅蓝色区域所示为马达结构域，粉色区域所示为IQ-Motif，黑色箭头所示为该蛋白尾部结构的起始区。优雅蝈螽（Gampsocleisgratiosa）；小鼠（Musmusculus）：EDL12895.1；黑猩猩（Pantroglodytes）：JAA31795.1；山大齿猛（Odontomachusmonticola）：BBF97917.1；灰仓鼠（Cricetulusgriseus）：EGW14984.1；人（Homosapiens）：NP_510880.2；内华达古白蚁（Zootermopsisnevadensis）：KDR16277.1。TheyellowregionshowstheKE-richsequence,thegreenregionshowsthePDZdomain,thelightblueregionshowstheMotordomain,thepinkregionshowstheIQ-Motif,theblackarrowshowsthestartingregionofthetaildomain.2.2.5系统进化分析从NCBI蛋白质数据库中检索其他物种的Myosin18A蛋白氨基酸序列，使用MEGA6.0软件以N-J法构建系统进化树（图2-4）。系统进化结果表明：优雅蝈螽Myosin18A蛋白在进化上更接近于内华达古白蚁（Zootermopsisnevadensis）和山大齿猛蚁（Odontomachusmonticola），在进化上位于脊椎动物后，处于较低等级。各分支节点的数值均介于99~100之间，可信度较高。

第二章GgMyo18a基因信息学分析21图2-4不同物种间Myosin18A蛋白系统进化分析Fig.2-4PhylogeneticanalysisofMyosin18Aproteinindifferentspecies在MEGA6.0中用N-J法构建系统进化树，Bootstrp值设置为1000。图中红色加粗物种名为优雅蝈螽。系统进化树中各物种GeneBank登录号为：安氏蜂鸟（Calypteanna）：XP_030318562.1；蓝山雀（Cyanistescaeruleus）：XP_023795297.1；多疣壁虎（Gekkojaponicus）：XP_015277384.1；变色龙（Anoliscarolinensis）：XP_016852768.1；人（Homosapiens）：AAH39612.1；小鼠（Musmusculus）：AAI38367.1；双条吻蚓（Rhinatremabivittatum）：XP_029466989.1；斑马拟丽鱼（Maylandiazebra）：XP_023010026.1；大弹涂鱼（Boleophthalmuspectinirostris）：XP_020789156.1；山大齿猛蚁（Odontomachusmonticola）：BBF97917.1；内华达古白蚁（Zootermopsisnevadensis）：KDR16277.1。ThephylogenetictreewasconstructedusingtheN-JmethodinMEGA6.0,theBootstrpvaluewassetto1000.Gampsocleisgratiosawasmarkedinredbold.2.2.6蛋白质结构域分析利用SMART在线工具对Myosin18A蛋白进行结构域预测（图2-5）。结果显示：Myosin18A蛋白在360-441氨基酸位置为PDZ结构域（氨基酸序列：GDFGFSLRRAMVVERLASGQMKAVIFAEPGTIVQHNNETGLLPGDRLLEVNGVVVDDKSREEIIDLIKSSSSSVTVKVQPVP），549~1326氨基酸位置为马达结构域，1327~1349氨基酸位置为IQ-Motif（氨基酸序列：RLTDHVVRLQARCRGYLARRRLA），1386~1487氨基酸位置为Coiled-coilregion1结构域，1511~2083氨基酸位置为Coiled-coilregion2

【参考文献】：
期刊论文
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[4]果蝇非常规肌球蛋白的结构与功能[J]. 曹洋,沈梅,张洁,李向东.  应用昆虫学报. 2011(02)
[5]优雅蝈螽与暗褐蝈螽精子束的显微观察[J]. 王莉,常岩林,冯晓丽,石福明.  昆虫学报. 2010(05)
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本文编号：3584585