结核分枝杆菌RD区基因Rv1988的构建、表达及免疫学功能研究

发布时间：2022-02-10 21:56

　　目的构建结核分枝杆菌（Mtb）Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,将克隆片段与质粒pET30b进行连接,构建重组质粒pET30b-Rv1988,以基因工程技术表达并纯化目的蛋白rRv1988。从山西省长治医学院和平医院感染科募集26例符合要求的受试者,采用全血IFN-γ分析试验（WBIA）检测Rv1988抗原诱导Mtb感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的IFN-γ水平及其差异。其中动物试验设5个组（PBS组、BCG组、DMT组、rRv1988/DMT组及BCG+rRv1988/DMT组）,皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度,脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并进行数据分析。结果成功构建了Rv1988基因重组载体,表达并纯化了重组蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(09)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

pET30b-Rv1988的构建、表达及鉴定

共筛选出Mtb感染者26例,其中活动期TB患者(ATB)13例、潜伏感染者(LTBI)13例,健康对照者(Healthy controls, HCs)9例,IFN-γ水平检测结果见图2A、2B。非特异性刺激物PHA刺激Mtb感染者和健康对照者产生的IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05);rEC和rRv1988蛋白刺激Mtb感染者产生的IFN-γ水平与健康对照组相比差异有统计学意义(t=11.47、7.972和10.21、6.831, 均P<0.01),两蛋白刺激ATB人群产生的IFN-γ水平均显著高于LTBI人群(t=3.939和2.67, 均P<0.05)。3 小鼠血清中抗原特异性抗体水平

经间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG、IgG1及IgG2a水平,结果见图3。与DMT组相比三免疫组上述抗体水平均升高,其中BCG+rRv1988/DMT组抗体滴度最高,其次为rRv1988/DMT组,BCG组较低(F=755.1、326.5和193.1, 均P<0.01)。BCG+rRv1988/DMT组和rRv1988/DMT组的IgG2a∶IgG1比值显著高于BCG组(IgG2a∶IgG1>1)(F=12.5, P<0.05)。显示rRv1988以诱导Th1型细胞免疫应答类型为主。4 Rv1988刺激小鼠脾细胞产生的细胞因子水平

【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌RD区蛋白研究进展[J]. 李文彬,万康林.  中国人兽共患病学报. 2018(04)
[2]结核分支杆菌RD区在结核病诊断及疫苗中的研究进展[J]. 罗微.  中华传染病杂志. 2017 (11)
[3]结核分枝杆菌比较基因组学研究进展[J]. 池水晶,宝福凯,柳爱华.  科技通报. 2013(09)



本文编号：3619596