阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者二次基因突变促进克隆增殖的机制研究

发布时间：2022-05-08 14:09

　　目的:分析阵发性睡眠性血红蛋白尿症（Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH）患者的临床数据,评估糖皮质激素及化疗的治疗疗效及预后影响因素;通过全外显子测序技术分析PIG-A基因突变及PIG-A基因突变之外的其他基因突变,筛选可能致病突变并研究其在PNH克隆增殖中的作用,初步探讨PNH克隆获得增殖优势的可能机制。材料与方法:1.回顾性分析天津医科大学总医院血液科92例PNH患者的临床资料,总结PNH患者的临床特征及常见并发症,观察糖皮质激素治疗及化疗的疗效,分析影响生存和预后的危险因素,包括LDH水平、PNH克隆大小、是否合并血栓、是否合并骨髓衰竭、溶血发作频率与预后之间的关联。2.选取PNH患者13例,免疫磁珠分选外周血粒细胞的CD59^-细胞,提取CD59^-细胞基因组DNA进行全基因组外显子测序,对测序原始数据进行生物信息处理、分析并筛选致病突变基因。分析PIG-A基因突变位点、突变形式及突变率;对上述筛选出的PIG-A基因之外的其他突变基因及血栓相关基因进行基因聚类及突变聚类分析,同时进行KEGG信号... 

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、92例PNH患者临床特征及疗效分析总结
    1.1 对象和方法
        1.1.1 研究对象
        1.1.2 研究方法
        1.1.3 治疗方法
    1.2 结果
        1.2.1 纳入患者的基本特征
        1.2.2 实验室检查基线数据
        1.2.3 糖皮质激素疗效分析
        1.2.4 化疗疗效及安全性分析
        1.2.5 并发症和转归
        1.2.6 PNH克隆大小与并发症的关系
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、13例PNH患者全外显子测序结果分析
    2.1 对象和方法
        2.1.1 病例和对照
        2.1.2 主要试剂、仪器
        2.1.3 主要生物医学应用软件
        2.1.4 主要生物信息学数据库
        2.1.5 实验方法
        2.1.6 生物信息处理分析
    2.2 结果
        2.2.1 原始测序数据概括
        2.2.2 PIG-A基因突变分析
        2.2.3 PIG-A基因以外的其他体细胞基因聚类分析及突变聚类分析
        2.2.4 KEGG信号通路富集分析
        2.2.5 血栓相关突变基因分析
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、致病突变基因筛选及PNH克隆增殖机制研究
    3.1 对象和方法
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 主要试剂、仪器
        3.1.3 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 K562细胞中18种突变基因mRNA的表达检测
        3.2.2 PNH患者CD59-细胞内PNH克隆检测及分选流式图
        3.2.3 PNH患者CD59-细胞中18种突变基因mRNA的表达检测
        3.2.4 筛选目的基因进行深入研究
        3.2.5 qPCR测定K562细胞中RBPJ、siRNA RBPJ mRNA的表达结果及转染效率检测
        3.2.6 siRNA RBPJ转染前后24h,48h,72h K562细胞增殖活性比较
        3.2.7 siRNA RBPJ转染前后24h,48h,72h K562细胞凋亡率比较
        3.2.8 siRNA RBPJ转染前后K562细胞的细胞周期分布结果比较
    3.3 讨论
    3.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述 阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病机制研究进展
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3651798