杜鹃红山茶实时定量PCR内参基因筛选及验证

发布时间：2022-07-04 21:24

　　【目的】实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）以高灵敏度和特异性等优点,成为基因表达分析的主要工具,而选择适合不同条件下工作的内参是qRT-PCR分析的前提。筛选得到适用于杜鹃红山茶不同器官、不同时期花瓣的qRT-PCR分析的内参基因,为后续相关基因功能研究提供可用的内参基因。【方法】选择转录延伸因子编码基因（EF1α）、α-tubulin（TUA）、β-tubulin（TUB）、Ubiquitin（UBQ）、肌动蛋白（Actin）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）6个看家基因,使用2种不同的计算程序GeNorm和NormFinder评估了6个基因表达的稳定性。进一步通过CaGASA3基因的表达模式验证了所选内参基因的适用性。【结果】在不同器官中通过GeNorm和NormFinder筛选出稳定性最好的基因,排名前2位的均为TUA和GAPDH,GAPDH基因在两种计算程序评估中稳定性均最佳。而在不同时期花瓣中,通过2种程序得出排名前2位的内参基因均为T... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 总RNA提取和cDNA合成
        1.2.2 内参基因的选择和引物设计
        1.2.3 qRT-PCR反应条件
        1.2.4 引物特异性鉴定及扩增效率计算
        1.2.5 内参基因稳定性验证及CaGASA3基因表达模式分析
        1.2.6 数据分析与内参基因的确认
2 结果与分析
    2.1 总RNA质量及引物特异性
    2.2 引物扩增特异性分析和扩增效率
    2.3 候选内参基因表达丰度分析
    2.4 候选内参基因表达稳定性分析
        2.4.1 GeNorm分析
        2.4.2 NormFinder分析
    2.5 内参基因稳定性的验证
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]萱草不同器官实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. 梁锦,刘海婷,钟荣,李昊,尹冬梅,刘翔,秦巧平,张志国,段可,倪迪安.  植物生理学报. 2020(09)
[2]大别山黄杜鹃根茎叶花内参基因的表达稳定性评价[J]. 张羽佳,舒读,董雪,杜睿琛,李志良,王书珍.  分子植物育种. 2020(21)
[3]彩色马蹄莲不同品种和组织qRT-PCR内参基因筛选[J]. 周琳,张永春,蔡友铭,赵冰雪,付椿淇,杨柳燕.  分子植物育种. 2020(12)
[4]连翘花器官生长阶段内参基因筛选与评估[J]. 曹亚萍,王勇飞,贾孟君,贺嘉欣,张鑫瑞,李政,乔永刚,宋芸.  山西农业科学. 2020(03)
[5]甜樱桃花芽不同发育时期内参基因的筛选与验证[J]. 仇志浪,何美乾,文壮,杨鵾,洪怡,文晓鹏.  种子. 2020(02)
[6]小苍兰实时荧光定量PCR中的内参基因筛选[J]. 丁苏芹,李玺,唐东芹.  南京林业大学学报(自然科学版). 2020(03)
[7]不同光质条件下刺葡萄红色愈伤组织的RT-qPCR内参基因筛选[J]. 潘红,赖呈纯,张静,黄贤贵,林玉玲,赖钟雄.  应用与环境生物学报. 2019(06)
[8]不同光照条件下杜鹃红山茶幼苗的生长效应及抗氧化生理响应[J]. 李先民,刘新亮,李春牛,卢家仕,周锦业,黄昌艳,卜朝阳.  热带作物学报. 2019(04)
[9]板栗实时定量PCR内参基因的筛选与验证[J]. 陈国松,李靖同,刘阳,曹庆芹,张卿,秦岭,邢宇.  植物生理学报. 2019(03)
[10]授粉后红球姜雌性生殖器官qRT-PCR的内参基因筛选[J]. 林浩川,钟春梅,孙姝兰.  华南师范大学学报(自然科学版). 2017(01)



本文编号：3655950