表达禽流感H5N1血凝素抗原（HA）和H9N2血凝素抗原（HA）融合基因重组腺病毒二价苗的构建

发布时间：2022-07-29 10:27

　　为了构建禽流感病毒H5N1亚型禽流感病毒HA和H9N2亚型禽流感HA融合基因表达的重组腺病毒。根据流行病学调查并参考文献研究结果,合成了优势流行H5N1和H9N2的保护性抗原HA基因的融合基因片段,并将该融合基因片段克隆到在pUC57载体,命名为pUC-57H5H9HA。该融合基因片段经特异酶切后与腺病毒穿梭质粒pDC315连接,获得携带目的融合基因腺病毒穿梭质粒pDC315-H5H9HA;将该重组穿梭质粒与AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒（pBHGlox（delta）E1,3Cre）经Cre/loxP酶切重组,构建成重组腺病毒（rAd-H5H9HA）;Ad-H5H9HA感染293细胞后,扩增病毒基因,纯化病毒及检测病毒滴度。PCR鉴定及基因测序分析,H5N1HAH9N2HA（H5H9HA）融合基因表达的重组腺病毒载体构建成功;经过重组腺病毒r Ad-H5H9HA免疫SPF鸡后的抗体检测,证实了重组腺病毒r Ad-H5H9HA诱导了H5N1和H9N2的特异抗体,而且抗体水平达到了国家免疫标准。本研究成功构建的重组腺病毒rAd-H5H9HA,可以作为预防H5N1和H9N2两个亚型病毒的... 

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 细胞及菌株
    1.2 工具酶及主要试剂
    1.3 实验动物
2 方法
    2.1 H5N1HA和H9N2HA融合基因质粒的克隆
    2.2 带有目的融合基因的腺病毒穿梭质粒pDC315-H5H9HA的构建
    2.3 重组腺病毒载体的包装和扩繁
    2.4 重组腺病毒Ad-H5H9HA的PCR鉴定及扩增纯化
    2.5 以编码H5N1H9N2 HA融合基因的重组腺病毒疫苗免疫动物的抗体表达
3 结果
    3.1 H5N1HA和H9N2HA融合基因质粒pUC57-H5H9HA的鉴定
    3.2 腺病毒穿梭质粒pDC315-H5H9HA的构建
    3.3 重组腺病毒Ad-H5H9HA的产生和PCR鉴定
    3.4 重组腺病毒疫苗免疫动物的抗体表达
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]禽流感疫苗研究进展[J]. 申松玮,彭大新.  动物医学进展. 2019(05)
[2]透过禽流感看我国重大动物疫病防控策略[J]. 廖明.  兽医导刊. 2017(15)
[3]H9N2亚型禽流感病毒流行病学及其疫苗的研究进展[J]. 丛彦龙,钟颖,孙艺学,丁壮.  中国兽医学报. 2017(02)
[4]H5N1禽流感疫苗研究进展及免疫效果影响因素分析[J]. 蒋文明,陈继明.  中国动物检疫. 2015(11)
[5]H5N1禽流感病毒HA和NA基因重组腺病毒共表达载体的构建[J]. 王青,胡建和,郑素玲.  生物技术通报. 2010(10)
[6]共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定[J]. 郭建强,姚立红,陈爱珺,徐一,贾润清,薄洪,董婕,周剑芳,舒跃龙,张智清.  病毒学报. 2009(02)



本文编号：3666292