赤拟谷盗CYP346基因家族介导磷化氢抗性的机理研究
发布时间：2022-09-30 18:50
赤拟谷盗（Tribolium castaneum）是一种具有重要经济意义的世界性储藏物害虫,最重要的防治方法是磷化氢熏蒸,由于长期大量而不合理的使用,导致赤拟谷盗对磷化氢的抗性逐渐增加,明确赤拟谷盗对磷化氢的抗性机理对合理的防治策略的提出以及替代有效熏蒸剂的开发具有重要的作用。细胞色素P450酶是昆虫体内三大解毒代谢酶系之一,是昆虫体内唯一介导多种杀虫剂抗性的酶系。为探讨细胞色素P450在赤拟谷盗对磷化氢产生抗性的作用,本论文以不同抗性水平的赤拟谷盗为研究对象,在准确测定其对磷化氢的抗性系数的基础上;通过生理生化及分子生物学方法研究赤拟谷盗细胞色素P450与磷化氢抗药性的关系,得出以下结果:（1）采用FAO推荐的磷化氢测定方法对采自不同地区的2个赤拟谷盗品系进行抗性测定,结果表明,深圳（SZ）品系属于高抗性品系,其LC50为7763.9μg/L,抗性系数达862.7;云南（YN）品系为敏感品系,抗性系数为3.0。酶活力测定结果表明,高抗品系（SZ）的P450比活力显著高于敏感品系（P＜0.05）。利用细胞色素P450酶的专一性抑制剂增效醚（PBO）处理后,2个品系...
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 赤拟谷盗的危害及研究现状
1.2 储粮害虫对磷化氢抗药性的现状概述
1.3 赤拟谷盗磷化氢抗性机制的概述
1.4 细胞色素P450 酶系
1.4.1 细胞色素P450 酶系的构成
1.4.2 细胞色素P450 酶的特征与多样性
1.4.3 细胞色素P450 介导昆虫的抗药性
1.5 荧光定量PCR
1.6 RNA干扰技术研究进展
1.7 本研究立题依据及研究内容
1.7.1 立题依据
1.7.2 主要内容
第二章 赤拟谷盗的磷化氢抗性测定及细胞色素P450 酶活测定
2.1 材料与方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 试验方法
2.1.5 数据分析
2.2 结果与分析
2.2.1 赤拟谷盗对磷化氢抗性水平测定
2.2.2 细胞色素P450 比活力的测定及PBO对其抑制作用
2.2.3 PBO对磷化氢的增效作用
2.3 讨论
第三章 CYP346 基因家族5 条基因的序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因的氨基酸序列分析
3.2 结果与分析
3.2.1 赤拟谷盗CYP346 基因家族的氨基酸序列分析
3.2.2 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因同源性分析
3.3 讨论
第四章 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因的表达模式及其与磷化氢抗性关系研究
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.1.4 试验方法
4.1.5 赤拟谷盗总RNA提取
4.1.6 RNA浓度及质量的检测
4.1.7 第一链cDNA的合成
4.1.8 定量PCR引物的设计与内参基因的选择
4.1.9 基因引物特异性验证、PCR产物熔解曲线与扩增效率的分析
4.1.10 荧光定量PCR反应
4.1.11 数据处理与分析
4.2 结果与分析
4.2.1 RNA提取结果
4.2.2 引物特异性验证与扩增效率分析
4.2.3 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因在不同品系的表达分析
4.2.4 CYP346 基因家族在磷化氢胁迫下的表达分析
4.3 讨论
第五章 基于RNAi技术对赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因的功能验证
5.1 材料与方法
5.1.1 供试昆虫
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器
5.1.4 研究方法
5.2 结果与分析
5.2.1 CYP346 基因家族的沉默效率检测
5.2.2 干扰CYP346 基因家族后赤拟谷盗对磷化氢的敏感性测定
5.3 讨论
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.1.1 明确赤拟谷盗的磷化氢抗性水平及P450 酶在抗性形成中的作用
6.1.2 明确赤拟谷盗CYP346 基因家族基因氨基酸序列
6.1.3 荧光定量PCR分析CYP346 家族5 条基因在不同抗性品系中以及经磷化氢胁迫后的表达模式
6.1.4 基于RNAi的赤拟谷盗CYP346 基因家族在磷化氢抗性中的作用
6.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间论文发表情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]实时荧光定量PCR技术应用研究[J]. 杨弘华,宋燕燕,林晓波,张敏瑜,李妍,倪焕峰,刘洋. 山东化工. 2016(22)
[2]昆虫RNA干扰中双链RNA的转运方式[J]. 刘吉升,朱文辉,廖文丽,卜晓玲,江婉仪. 昆虫学报. 2016(06)
[3]国际储藏物保护研究进展——第十一届国际储藏物保护工作会议情况综述[J]. 李月,李克强,郭道林,付鹏程,李浩杰,许胜伟,石恒. 粮食储藏. 2015(01)
[4]甜菜夜蛾UAP的克隆、时空表达及RNAi研究[J]. 陈洁,陈宏鑫,姚琼,张文庆. 中国农业科学. 2014(07)
[5]磷化氢诱导下赤拟谷盗实时定量PCR内参基因的筛选[J]. 刘金泊,欧静,姚富姣,何磊,奚耕思,魏朝明. 农业生物技术学报. 2014(02)
[6]绿盲蝽P450基因的克隆及增效醚对P450酶活性的抑制作用[J]. 许新新,谭瑶,高希武. 应用昆虫学报. 2012(02)
[7]鄂中地区四种储粮害虫对磷化氢抗性发展及对策研究[J]. 周天智,刘士强,马文斌,高兴明,付文忠,喻梅. 粮食储藏. 2011(04)
[8]实时定量PCR技术及其应用[J]. 刘彩云,刘洪祥,王凤龙. 安徽农业科学. 2011(05)
[9]高效液相色谱法测定家蝇细胞色素P450O-脱甲基活性[J]. 艾国民,王庆敏,邹东云,高希武,李富根. 分析化学. 2009(08)
[10]RNAi技术的研究进展及其应用[J]. 程弈星,刘东成. 科技创新导报. 2008(09)
博士论文
[1]朱砂叶螨抗甲氰菊酯P450基因鉴定及其转录调控研究[D]. 石力.西南大学 2017
[2]赤拟谷盗RNAi及dsRNA脱靶效应的研究[D]. 王锦达.南京农业大学 2015
[3]柑橘全爪螨细胞色素P450及其相关基因的鉴定和表达模式研究[D]. 丁天波.西南大学 2014
[4]植物次生物质对棉铃虫细胞色素P450s的诱导及CYP6B6基因的克隆与表达[D]. 刘小宁.中国农业大学 2005
硕士论文
[1]朱砂叶螨UGT201D3基因参与阿维菌素抗药性的机制研究[D]. 王梦瑶.西南大学 2018
[2]赤拟谷盗细胞色素P450 CYP345D3 cDNA基因克隆与序列分析[D]. 杨帆.西南大学 2008
本文编号：3684082
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 赤拟谷盗的危害及研究现状
1.2 储粮害虫对磷化氢抗药性的现状概述
1.3 赤拟谷盗磷化氢抗性机制的概述
1.4 细胞色素P450 酶系
1.4.1 细胞色素P450 酶系的构成
1.4.2 细胞色素P450 酶的特征与多样性
1.4.3 细胞色素P450 介导昆虫的抗药性
1.5 荧光定量PCR
1.6 RNA干扰技术研究进展
1.7 本研究立题依据及研究内容
1.7.1 立题依据
1.7.2 主要内容
第二章 赤拟谷盗的磷化氢抗性测定及细胞色素P450 酶活测定
2.1 材料与方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 试验方法
2.1.5 数据分析
2.2 结果与分析
2.2.1 赤拟谷盗对磷化氢抗性水平测定
2.2.2 细胞色素P450 比活力的测定及PBO对其抑制作用
2.2.3 PBO对磷化氢的增效作用
2.3 讨论
第三章 CYP346 基因家族5 条基因的序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因的氨基酸序列分析
3.2 结果与分析
3.2.1 赤拟谷盗CYP346 基因家族的氨基酸序列分析
3.2.2 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因同源性分析
3.3 讨论
第四章 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因的表达模式及其与磷化氢抗性关系研究
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.1.4 试验方法
4.1.5 赤拟谷盗总RNA提取
4.1.6 RNA浓度及质量的检测
4.1.7 第一链cDNA的合成
4.1.8 定量PCR引物的设计与内参基因的选择
4.1.9 基因引物特异性验证、PCR产物熔解曲线与扩增效率的分析
4.1.10 荧光定量PCR反应
4.1.11 数据处理与分析
4.2 结果与分析
4.2.1 RNA提取结果
4.2.2 引物特异性验证与扩增效率分析
4.2.3 赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因在不同品系的表达分析
4.2.4 CYP346 基因家族在磷化氢胁迫下的表达分析
4.3 讨论
第五章 基于RNAi技术对赤拟谷盗CYP346 家族5 条基因的功能验证
5.1 材料与方法
5.1.1 供试昆虫
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器
5.1.4 研究方法
5.2 结果与分析
5.2.1 CYP346 基因家族的沉默效率检测
5.2.2 干扰CYP346 基因家族后赤拟谷盗对磷化氢的敏感性测定
5.3 讨论
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.1.1 明确赤拟谷盗的磷化氢抗性水平及P450 酶在抗性形成中的作用
6.1.2 明确赤拟谷盗CYP346 基因家族基因氨基酸序列
6.1.3 荧光定量PCR分析CYP346 家族5 条基因在不同抗性品系中以及经磷化氢胁迫后的表达模式
6.1.4 基于RNAi的赤拟谷盗CYP346 基因家族在磷化氢抗性中的作用
6.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间论文发表情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]实时荧光定量PCR技术应用研究[J]. 杨弘华,宋燕燕,林晓波,张敏瑜,李妍,倪焕峰,刘洋. 山东化工. 2016(22)
[2]昆虫RNA干扰中双链RNA的转运方式[J]. 刘吉升,朱文辉,廖文丽,卜晓玲,江婉仪. 昆虫学报. 2016(06)
[3]国际储藏物保护研究进展——第十一届国际储藏物保护工作会议情况综述[J]. 李月,李克强,郭道林,付鹏程,李浩杰,许胜伟,石恒. 粮食储藏. 2015(01)
[4]甜菜夜蛾UAP的克隆、时空表达及RNAi研究[J]. 陈洁,陈宏鑫,姚琼,张文庆. 中国农业科学. 2014(07)
[5]磷化氢诱导下赤拟谷盗实时定量PCR内参基因的筛选[J]. 刘金泊,欧静,姚富姣,何磊,奚耕思,魏朝明. 农业生物技术学报. 2014(02)
[6]绿盲蝽P450基因的克隆及增效醚对P450酶活性的抑制作用[J]. 许新新,谭瑶,高希武. 应用昆虫学报. 2012(02)
[7]鄂中地区四种储粮害虫对磷化氢抗性发展及对策研究[J]. 周天智,刘士强,马文斌,高兴明,付文忠,喻梅. 粮食储藏. 2011(04)
[8]实时定量PCR技术及其应用[J]. 刘彩云,刘洪祥,王凤龙. 安徽农业科学. 2011(05)
[9]高效液相色谱法测定家蝇细胞色素P450O-脱甲基活性[J]. 艾国民,王庆敏,邹东云,高希武,李富根. 分析化学. 2009(08)
[10]RNAi技术的研究进展及其应用[J]. 程弈星,刘东成. 科技创新导报. 2008(09)
博士论文
[1]朱砂叶螨抗甲氰菊酯P450基因鉴定及其转录调控研究[D]. 石力.西南大学 2017
[2]赤拟谷盗RNAi及dsRNA脱靶效应的研究[D]. 王锦达.南京农业大学 2015
[3]柑橘全爪螨细胞色素P450及其相关基因的鉴定和表达模式研究[D]. 丁天波.西南大学 2014
[4]植物次生物质对棉铃虫细胞色素P450s的诱导及CYP6B6基因的克隆与表达[D]. 刘小宁.中国农业大学 2005
硕士论文
[1]朱砂叶螨UGT201D3基因参与阿维菌素抗药性的机制研究[D]. 王梦瑶.西南大学 2018
[2]赤拟谷盗细胞色素P450 CYP345D3 cDNA基因克隆与序列分析[D]. 杨帆.西南大学 2008
本文编号：3684082
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3684082.html
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