棉铃虫ABC转运蛋白ABCG1的基因克
发布时间:2022-10-09 18:06
【目的】长期种植转Bacillus thuringiensis(Bt)基因作物使一些靶标害虫产生了Bt抗性,有研究表明小菜蛾Plutella xylostella的white基因表达下调使其产生了Cry1Ac抗性,由于Pxwhite蛋白与ABC转运蛋白ABCG1同属于ABCG亚家族,我们推测棉铃虫Helicoverpa armigera ABCG1基因(HaABCG1)的表达下调可能与棉铃虫对Cry1Ac毒素的抗性有关。【方法】克隆并分析HaABCG1的开放阅读框(open reading frame,ORF),通过构建HaABCG1基因的表达载体检测HaABCG1蛋白在TnH5细胞中的亚细胞定位;通过细胞毒力实验验证HaABCG1蛋白与Cry1Ac毒素的关系;利用RNAi技术验证HaABCG1表达下调是否会降低棉铃虫对Cry1Ac毒素的敏感性。【结果】棉铃虫ABCG1基因的开放阅读框长1 896 bp,编码蛋白含631个氨基酸残基,分子质量估计为69.63 k D。离体昆虫细胞表达的HaABCG1蛋白主要定位在细胞的核膜和内质网。通过RNA干扰和生物测定实验发现...
【文章页数】:12 页
【文章目录】:
1 材料与方法
1.1 供试昆虫
1.2 主要试剂
1.3 棉铃虫ABCG1基因的生物信息学分析
1.4 PCR引物和探针的设计与合成
1.5 棉铃虫总RNA的提取、c DNA第1链的合成
1.6 目的基因的扩增及克隆
1.7 供体质粒p EGFP-N1/Ha ABCG1的构建
1.8 昆虫细胞的培养以及重组质粒转染细胞
1.9 Ha ABCG1蛋白的亚细胞定位
1.1 0 Ha ABCG1介导不同Bt毒素毒力的细胞功能验证
1.1 1 RNAi
1.1 2 数据分析
2 结果
2.1 棉铃虫Ha ABCG1基因的克隆及蛋白序列分析
2.2 Ha ABCG1基因的进化树分析
2.3 Ha ABCG1-GFP融合蛋白的亚细胞定位以及Ha ABCG1介导Bt毒素穿孔的细胞毒力功能验证
2.4 基于RNAi和生物测定的棉铃虫Ha ABCG1基因功能验证
3 讨论与结论
【参考文献】:
期刊论文
[1]Cotton bollworm resistance to Bt transgenic cotton: A case analysis[J]. LIU ChenXi, LI YunHe, GAO YuLin, NING ChangMing & WU KongMing State Key Laboratory of Plant Disease and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100193, China. Science China(Life Sciences). 2010(08)
[2]人工饲养棉铃虫技术的改进[J]. 梁革梅,谭维嘉,郭予元. 植物保护. 1999(02)
本文编号:3689109
【文章页数】:12 页
【文章目录】:
1 材料与方法
1.1 供试昆虫
1.2 主要试剂
1.3 棉铃虫ABCG1基因的生物信息学分析
1.4 PCR引物和探针的设计与合成
1.5 棉铃虫总RNA的提取、c DNA第1链的合成
1.6 目的基因的扩增及克隆
1.7 供体质粒p EGFP-N1/Ha ABCG1的构建
1.8 昆虫细胞的培养以及重组质粒转染细胞
1.9 Ha ABCG1蛋白的亚细胞定位
1.1 0 Ha ABCG1介导不同Bt毒素毒力的细胞功能验证
1.1 1 RNAi
1.1 2 数据分析
2 结果
2.1 棉铃虫Ha ABCG1基因的克隆及蛋白序列分析
2.2 Ha ABCG1基因的进化树分析
2.3 Ha ABCG1-GFP融合蛋白的亚细胞定位以及Ha ABCG1介导Bt毒素穿孔的细胞毒力功能验证
2.4 基于RNAi和生物测定的棉铃虫Ha ABCG1基因功能验证
3 讨论与结论
【参考文献】:
期刊论文
[1]Cotton bollworm resistance to Bt transgenic cotton: A case analysis[J]. LIU ChenXi, LI YunHe, GAO YuLin, NING ChangMing & WU KongMing State Key Laboratory of Plant Disease and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100193, China. Science China(Life Sciences). 2010(08)
[2]人工饲养棉铃虫技术的改进[J]. 梁革梅,谭维嘉,郭予元. 植物保护. 1999(02)
本文编号:3689109
本文链接:https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3689109.html
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