PTEN基因沉默调控MAPK/JNK信号表达在结肠癌肿瘤细胞增殖中的作用机制

发布时间：2022-12-24 08:17

　　目的:探讨抑癌基因PTEN调控MAPK/JNK信号通路对结直肠癌肿瘤细胞的发生、发展及相关分子机制。方法:（1）细胞培养及分组:收集结直肠癌细胞SW620分成3组,各组细胞悬液浓度调至3*10~5 cells/ml;（2）实验分组及转染:运用RNA干扰技术在体外沉默PTEN基因并转染结直肠癌细胞后设立3组对照即:（1）空白对照组（不作任何处理）、（2）干扰空载体组（转染siRNA-NC）、（3）干扰表达组（转染PETN siRNA）;（3）将3组转染后的结直肠癌细胞于培养箱中培养72h;（4）RT-qPCR检测结直肠癌细胞系样本中PTEN基因的含量;（5）采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖情况;（6）流式细胞术检测PTEN对结直肠癌细胞周期的影响;（7）Western blot检测各组结直肠癌细胞中JNK、p-JNK、c-Fos和AP-1蛋白的表达含量。结果:（1）RT-qPCR检测结果显示:与干扰空载体组和空白对照组相比,干扰表达组PTEN的相对含量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;（2）MTT分析结果显示:与干扰空载体组和空白对照组相比,干扰表达组的细胞增殖显著增加... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1.前言
2.材料
    2.1 材料
    2.2 主要试剂
    2.3 主要实验仪器
3.方法
    3.1 SW620 细胞培养及分组
    3.2 RT-QPCR检测SW620 细胞中PTEN的含量
        3.2.1 提取细胞总RNA
        3.2.2 RNA反转录
        3.2.3 RT-qPCR
    3.3 MTT检测各组细胞的增殖
    3.4 流式细胞术检测各组细胞的周期
    3.5 WESTERN BLOT检测各组细胞中JNK、P-JNK、C-FOS、AP-1 蛋白的表达
        3.5.1 样品制备
        3.5.2 蛋白浓度检测
        3.5.3 western blot
    3.6统计学处理
4.结果
    4.1 PETN SIRNA下调SW620 细胞中PTEN的表达
        4.1.1 扩增曲线
        4.1.2 熔解曲线
    4.2 PTEN基因沉默促进SW620 细胞的增殖
    4.3 PTEN基因沉默SW620 细胞G_2+S期比例增加
        4.3.1 周期图片
    4.4 PTEN基因沉默上调MAPK/JNK信号通路中蛋白表达
        4.4.1 灰度分析
5.讨论
6.结论
参考文献
综述
    参考文献
附录一
在读期间发表的主要学术论文及参与的课题
致谢



本文编号：3725836