草鱼生长激素基因的重组构建及转导赤眼鳟受精卵效果分析
发布时间：2023-05-24 22:28
本研究前期通过杂交技术得到草鱼、赤眼鳟正交F1(♀)的回交子代并对其进行形态学分析。分析结果显示:回交子代的生长性能显著高于亲本(P<0.05),回交子代与其亲本具有相似的头部的特征和眼睛颜色;回交子代与双亲的侧线下鳞数存在显著性差异(P<0.05),回交子代的超亲本可量性状占80.00%,我们有理由相信,其子代的生长性状差异与其遗传物质的变化有密切的联系,因此我们设计了转基因实验。转基因实验通过分子重组及克隆技术,将草鱼(Ctenopharymgodon idellus)GH(Growth hormone)基因及鲤鱼β肌动蛋白基因启动子的序列克隆到经酶切处理的转座子供体质粒(pTgf2-EFla-eGFP),构成重组质粒。将重组片段通过显微注射技术导入赤眼鳟受精卵中,获得转基因赤眼鳟群体。本实验旨在为培育生长迅速又有较强抗病性鱼品种提供研究思路和材料。根据中科院水生所胡炜研究员提供的草鱼GH基因表达载体质粒pCAgcGH的全长序列,设计一对带有特异酶切位点的引物,采用PCR扩增GH基因及鲤鱼β肌动蛋白基因启动子序列,再将其克隆到经酶切处理的供体质粒上...
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 转基因鱼的研究概括
2 鱼类GH基因转导研究进展
2.1 鱼类生长激素研究进展
2.1.1 鱼类生长激素作用机理及功能
2.1.2 鱼类生长激素在水产养殖上的应用
2.2 鱼类生长激素基因研究进展
3 鱼类远缘杂交在水产养殖上的应用进展
3.1 鱼类远缘杂交的研究进展
3.2 远缘杂交在鱼类生长、抗逆以及抗病等方面的应用
3.2.1 远缘杂交在鱼类生长上的应用
3.2.2 远缘杂交在鱼类抗逆、抗病方面的应用
3.3 本团队已开展的相关工作
4 转座子的研究进展及基因转导传统方法
4.1 金鱼Tgf2的研究概述
4.2 基因转导的方法
5 研究目的与意义
第二章 草鱼、赤眼鳟正交F1(♀)的回交子代形态分析
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.2.1 外部形态观察
1.2.2 可数性状
1.2.3 可量性状、框架性状
1.3 数据处理
2 结果与分析
2.1 外部形态观察
2.2 可数性状分析
2.3 可量性状
2.3.1 可量性状分析
2.3.2 形态比例分析
2.4 框架性状
3 讨论
3.1 回交子代的杂种优势
3.2 回交子代的形态差异分析
3.3 回交子代的超亲本性状
4 结论
第三章 目的基因(GH)的重组构建
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.2.1 目的基因的获取
1.2.2 转座子供体质粒pTgf2-EFla-eGFP的酶切
1.2.3 感受态细胞的制备
1.2.4 酶切产物与PCR产物连接与转化
1.2.5 重组质粒pCAgcGH-Tgf2-L-R的酶切验证与测序
2 结果与分析
2.1 GH基因PCR扩增结果
2.2 转座子供体质粒pTgf2-EFla-eGFP的酶切结果
2.3 连接与转化结果
2.4 重组质粒的酶切验证
3 讨论
第四章 基因转导及效果检测
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要仪器与试剂
1.2.1 试剂
1.2.2 主要仪器设备
1.3 实验方法
1.3.1 质粒的大量制备
1.3.2 显微注射前的准备
1.3.3 显微注射及胚胎培养
1.3.4 DNA提取
1.3.5 PCR阳性检测
1.3.6 二次PCR阳性检测
1.3.7 生长速度比较分析
2 结果与分析
2.1 DNA提取结果
2.2 二次PCR产物测序验证
2.3 生长速度比较结果分析
3 讨论与分析
第五章 问题与展望
1 结论
2 问题
3 研究展望
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3822402
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 转基因鱼的研究概括
2 鱼类GH基因转导研究进展
2.1 鱼类生长激素研究进展
2.1.1 鱼类生长激素作用机理及功能
2.1.2 鱼类生长激素在水产养殖上的应用
2.2 鱼类生长激素基因研究进展
3 鱼类远缘杂交在水产养殖上的应用进展
3.1 鱼类远缘杂交的研究进展
3.2 远缘杂交在鱼类生长、抗逆以及抗病等方面的应用
3.2.1 远缘杂交在鱼类生长上的应用
3.2.2 远缘杂交在鱼类抗逆、抗病方面的应用
3.3 本团队已开展的相关工作
4 转座子的研究进展及基因转导传统方法
4.1 金鱼Tgf2的研究概述
4.2 基因转导的方法
5 研究目的与意义
第二章 草鱼、赤眼鳟正交F1(♀)的回交子代形态分析
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.2.1 外部形态观察
1.2.2 可数性状
1.2.3 可量性状、框架性状
1.3 数据处理
2 结果与分析
2.1 外部形态观察
2.2 可数性状分析
2.3 可量性状
2.3.1 可量性状分析
2.3.2 形态比例分析
2.4 框架性状
3 讨论
3.1 回交子代的杂种优势
3.2 回交子代的形态差异分析
3.3 回交子代的超亲本性状
4 结论
第三章 目的基因(GH)的重组构建
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.2.1 目的基因的获取
1.2.2 转座子供体质粒pTgf2-EFla-eGFP的酶切
1.2.3 感受态细胞的制备
1.2.4 酶切产物与PCR产物连接与转化
1.2.5 重组质粒pCAgcGH-Tgf2-L-R的酶切验证与测序
2 结果与分析
2.1 GH基因PCR扩增结果
2.2 转座子供体质粒pTgf2-EFla-eGFP的酶切结果
2.3 连接与转化结果
2.4 重组质粒的酶切验证
3 讨论
第四章 基因转导及效果检测
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要仪器与试剂
1.2.1 试剂
1.2.2 主要仪器设备
1.3 实验方法
1.3.1 质粒的大量制备
1.3.2 显微注射前的准备
1.3.3 显微注射及胚胎培养
1.3.4 DNA提取
1.3.5 PCR阳性检测
1.3.6 二次PCR阳性检测
1.3.7 生长速度比较分析
2 结果与分析
2.1 DNA提取结果
2.2 二次PCR产物测序验证
2.3 生长速度比较结果分析
3 讨论与分析
第五章 问题与展望
1 结论
2 问题
3 研究展望
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3822402
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3822402.html
最近更新
教材专著
