利用CRISPR/Cas9技术制备Mindin基因敲除小鼠

发布时间：2023-10-31 17:41

　　针对Mindin基因编码序列设计3条单链向导RNA(sgRNA),制备相应质粒,将表达sgRNA和Cas9蛋白的质粒共同电转入小鼠成纤维细胞L929中,通过药物筛选获得细胞库.经单克隆测序检测细胞库中基因组的突变效率,选择效率最佳的sgRNA.体外转录获取sgRNA和Cas9mRNA,进行小鼠受精卵的显微注射后提取小鼠基因组DNA测序鉴定.产生的40只小鼠中17只发生不同程度的碱基插入或缺失,其中23号小鼠缺失10个碱基造成移码突变,Mindin基因表达被破坏,成功构建出Mindin基因敲除小鼠,为深入研究Mindin基因的生物学功能奠定了基础.

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
2 结果和分析
    2.1 sgRNA的设计和相应质粒的构建
    2.2 sgRNA敲除效率的检测
    2.3 利用CRISPR/Cas9制备Mindin基因敲除小鼠
3 讨论



本文编号：3859173