盐地碱蓬2个DREB1/CBF基因的克隆与表达调控分析

发布时间：2024-03-13 00:10

　　【目的】从盐地碱蓬(Suaeda salsa L.)中克隆2个DREB1/CBF,分析其序列特征、编码蛋白的亚细胞定位和转录激活活性,以及在非生物胁迫下的表达模式,为进一步研究盐地碱蓬的抗逆机制提供依据。【方法】利用同源克隆法获得盐地碱蓬2个DREB1/CBF片段,采用RACE技术克隆获得c DNA全长序列,分别命名为Ss CBF1和Ss CBF2。运用生物信息学软件对2个Ss CBF及其编码蛋白进行分析,并将它们分别与GFP融合构建植物表达载体,通过基因枪转化法导入洋葱表皮细胞进行瞬时表达,观察它们编码蛋白的亚细胞定位。利用酵母单杂交系统研究2个Ss CBF与DRE/CRT顺式作用元件的结合特异性和转录激活活性。采用Real time-PCR研究2个Ss CBF在低温、Na Cl、PEG以及ABA处理下的表达模式。【结果】Ss CBF1编码一个225个氨基酸的蛋白,预测分子量为25.4 k D,理论等电点为4.84。Ss CBF2编码一个由260个氨基酸组成的蛋白,预测分子量为28.6 k D,理论等电点为5.05。Ss CBF1和Ss CBF2均含有1个典型的AP2/ERF保守结构...

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 Ss CBF1和Ss CBF2片段的同源克隆
    1.3 Ss CBF1和Ss CBF2的c DNA全长序列的获得
    1.4 Ss CBF1和Ss CBF2的生物信息学分析
    1.5 Ss CBF1和Ss CBF2的亚细胞定位
    1.6 酵母单杂交
    1.7 荧光定量PCR分析
2 结果
    2.1 盐地碱蓬Ss CBF1和Ss CBF2的克隆与结构分析
    2.2 盐地碱蓬Ss CBF1、Ss CBF2蛋白序列同源性和系统进化分析
    2.3 Ss CBF1和Ss CBF2的亚细胞定位
    2.4 Ss CFB1和Ss CFB2在酵母中的功能验证
    2.5 Ss CBF1和Ss CBF2在盐地碱蓬中响应非生物胁迫的表达特性分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3926928