弧菌琼胶酶基因在原核细胞中的高效表达及酶理化性质研究

发布时间：2025-01-05 20:39

　　琼胶酶是一种能够降解琼脂以形成琼脂糖寡糖的糖苷水解酶,根据琼胶酶水解糖苷键的不同,可以分为α-琼胶酶(EC 3.2.1.158)与β-琼胶酶(EC 3.2.1.81)两类。目前,野生菌株生产琼胶酶存在诸多问题,缺点包括产酶量低、易污染、生长慢等,不利于大规模工业化生产。基于以上问题,本课题将一段弧菌琼胶酶蛋白基因重组于表达载体pET30a(+)上,然后转入宿主大肠杆菌BL21体内,通过宿主大肠杆菌的快速繁殖来实现琼胶酶的大量生产。构建成功的工程菌不仅产酶量高而且具有不易被杂菌污染、生长快的优点,这样为琼胶酶在今后工业化大规模生产提供理论依据。1.在本研究中,首先我们利用基因合成的方法合成了已报道的弧菌琼胶酶的基因,通过分子生物学手段将合成的弧菌琼胶酶基因aga2插入原核表达载体pET30a(+)中,并转入感受态细胞大肠杆菌BL21(DE3)中,构建成pET30a(+)-aga2重组表达载体。2.对构建的重组子进行诱导表达,利用DNS法测定琼胶酶酶活,对诱导条件和表达的琼胶酶酶学性质进行探究。构建成功的重组表达载体pET30a(+)-aga2,在IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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本文编号：4023232