点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究

发布时间：2017-07-08 00:00

  本文关键词：点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究

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【摘要】：旨在克隆点青霉菌(Penicillium notatum)中的葡萄糖氧化酶基因(GOD),在毕赤酵母(Phchia pastoris)中异源表达,纯化并研究其酶学性质。利用PCR技术从点青霉No.8312菌株的基因组DNA中克隆得到GOD基因,将该基因克隆到穿梭载体p MD-AOX上并在毕赤酵母X33中表达,对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示,X33-GOD可高表达具有活性的GOD,在30℃、pH6.5的条件下,其培养液上清GOD酶活可达496 U/mL,比活123.0 U/mg;重组表达的葡萄糖氧化酶最适温度为40-45℃,最适pH为6.0,酶的稳定性研究表明,该酶在pH3.5-7.0区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn~(2+)对其有激活作用;Ag~+对该酶活性有较大抑制作用。构建出GOD的高产毕赤酵母工程菌株,与点青霉GOD相比,具有更高的发酵酶活和比活。
【作者单位】： 河北省微生物研究所;中国科学院微生物研究所;
【关键词】： 葡萄糖氧化酶 点青霉菌 重组表达
【基金】：河北省科技计划项目(14292804D) 河北省科学院科技计划项目(20150503 LR62-3)
【分类号】：Q78;Q55
【正文快照】： 葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,EC 1.1.3.4,简氧化氢。因其氧化反应生成过氧化氢,在实际应用称GOD)是氧化-还原酶类的典型代表,能够在中葡萄糖氧化酶被用作抗菌剂。另外,葡萄糖氧化氧气存在时专一催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和过酶作为生物催化剂常用于临床诊断、食品和饮料

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本文编号：532257