独行菜LaMCT基因的克

发布时间：2017-07-27 14:15

  本文关键词：独行菜LaMCT基因的克隆、序列分析与原核表达

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【摘要】：强心苷作为药用植物独行菜(Lepidium apetalum)的活性成分,其化学和药理学研究已有良好的基础,但其生物合成途径目前仍不清楚。该研究以独行菜幼苗为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,PCR扩增得到了强心苷生物合成MEP途径的关键酶2-C-甲基赤藓醇-4-磷酸胞苷酰转移酶(MCT)基因的开放阅读框(ORF),命名为LaMCT(Genbank注册号KT832554),并进行序列分析和原核表达。序列分析结果表明:LaMCT基因ORF全长为912 bp,编码304个氨基酸。亚细胞定位和保守结构域分析结果表明:LaMCT蛋白位于叶绿体中,不含信号肽,没有跨膜区,含有类异戊二烯合成酶保守结构域(isoprenoid synthase domain)。系统进化树结果表明:LaMCT蛋白与拟南芥的MCT蛋白具有94%的序列相似性,亲缘关系较近。通过构建pET-32a-LaMCT原核表达载体,成功在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达LaMCT重组蛋白,并得到了纯化的LaMCT重组蛋白。该研究首次从独行菜中克隆了LaMCT基因,建立其稳定的原核表达体系,为LaMCT蛋白抗体的制备以及研究LaMCT基因在独行菜强心苷类化合物生物合成途径中的功能奠定了基础。
【作者单位】： 河南中医学院药学院;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心;
【关键词】： 独行菜 MCT 基因克隆 序列分析 原核表达
【基金】：国家重点基础研究发展计划“973”项目(2013CB531802) 河南中医学院博士科研基金(BSJJ2011-07)~~
【分类号】：Q943.2;S567.2
【正文快照】： 独行菜(Lepidium apetalum)是十字花科独行菜4-焦磷酸胞苷-2-C-甲基赤藓醇(4-diphosphocytidyl-属植物,其干燥成熟种子是我国传统中药北葶苈子,2C-methylerythritol,CDP-ME),MCT是强心苷类化具有泻肺平喘、利水消肿的功效(李红伟等,2013)。合物生物合成MEP途径的第3个关键酶(M

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