黑龙江地区猪源致病性大肠杆菌耐药性分析及PMQR基因检测

发布时间：2017-08-02 07:03

  本文关键词：黑龙江地区猪源致病性大肠杆菌耐药性分析及PMQR基因检测

  更多相关文章： 猪源致病性大肠杆菌 多重耐药 水平传播 接合子

【摘要】：在一段时间内,大肠杆菌被视为人和动物正常肠道菌群的组成部分,但后期的研究发现,某些血清型的大肠杆菌对于人和动物却有病原性,发生在猪身上则常表现为仔猪黄白痢以及猪水肿病,给养猪业带来巨大的经济损失,抗菌药物因此被广泛甚至不合理使用,这就导致大肠杆菌耐药性不断增强,尤其是多重耐药现象日益严重,同时接合性质粒等可移动遗传元件在耐药性水平传播过程中发挥了重要的作用,使得细菌产生获得性耐药性的现象不断发生,因此细菌耐药性分析及水平传播机制成为了当今相关学科争相研究的热点。氟喹诺酮类药物在养猪业不断得到使用,伴随之而来的耐药性也逐渐加重,虽然氟喹诺酮耐药基因一般介导低水平耐药,但是多种耐药基因的相互组合,或是与其他耐药机制的相互作用都可带来高水平耐药,甚至达到临床耐药。本试验对分离自黑龙江省部分地区的致病性大肠杆菌进行了耐药性分析,同时重点对质粒介导的氟喹诺酮耐药基因进行了检测,并通过接合试验,对耐药性水平传递的可能性进行了研究,旨在为该地区更加合理用药,以及后期耐药性的消除提供一定的理论依据。根据CLSI标准,本次试验通过微量肉汤二倍稀释法测定106株临床分离致病性菌株对8种常见药物的最小抑菌浓度(MIC),调查研究黑龙江省部分地区的致病性大肠杆菌对8种临床常见药物的耐药情况以及多重耐药大肠杆菌的检出率,试验结果为:106株猪源致病性大肠杆菌对8种兽医临床常用抗菌药物耐药率较高,均超过30%,其中对氟苯尼考的耐药率最高,高达72.64%;其次对头孢曲松(70.75%)、头孢噻呋(70.75%)、庆大霉素(66.04%)、阿米卡星(64.15%)耐药率非常高;对恩诺沙星(56.60%)、环丙沙星(48.11%)、多西环素(32.08%)耐药率也较高,且表现多重耐药(二重及以上耐药)的菌株所占比率高达73.58%。本试验还采用了纸片扩散法,进一步证实了耐药性数据的准确性。本试验对106株猪源致病性大肠杆菌质粒介导的氟喹诺酮耐药(Plasmid mediated fluoroquinolone resistant,PMQR)基因流行情况进行了检测,其中oqx AB,qnr S,aac(6’)-Ib-cr,qnr B,qep A的检出率分别为44.34%,40.57%,14.15%,8.49%,7.55%,而其它基因并没有检测到,这表明,现阶段PMQR基因分布率已经呈现上升趋势,所造成的直接后果就是用药疗效低,进而由于基因水平传播造成超级细菌的出现。本试验还通过接合试验,对耐药性水平传递的可能性进行了研究,同时通过比较接合前后耐药表型以及耐药基因型的变化,探讨可移动质粒在耐药性水平传播过程中所起到的作用,试验结果如下:41株氟喹诺酮耐药且PMQR基因阳性的供体菌共接合成功16株细菌,接合成功率高达39%,通过试验数据可以深刻的认识到,一方面必须加大对耐药基因的监测力度;同时另一方面还必须对耐药基因的水平传播机制进行研究,以期为新兽药的研发以及耐药性的消除提供一定的理论依据。
【关键词】：猪源致病性大肠杆菌 多重耐药 水平传播 接合子
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.612
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-19
• 1.1 大肠杆菌概述11-13
• 1.1.1 大肠杆菌的致病性11-12
• 1.1.2 大肠杆菌的流行性12
• 1.1.3 大肠杆菌的耐药现状12-13
• 1.2 氟喹诺酮药物的应用近况及抗菌作用机制13-14
• 1.2.1 氟喹诺酮药物的应用近况13-14
• 1.2.2 氟喹诺酮类药物的抑菌机制14
• 1.3 大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药情况及耐药机制14-17
• 1.3.1 大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药研究现状14-15
• 1.3.2 大肠杆菌对氟喹诺酮类的耐药机理15-17
• 1.4 水平基因转移概述17-18
• 1.5 研究的目的与意义18-19
• 2 材料与方法19-29
• 2.1 试验材料19-21
• 2.1.1 试验试剂19
• 2.1.2 主要仪器与设备19-20
• 2.1.3 培养基和常用溶液配制20-21
• 2.2 试验方法21-29
• 2.2.1 样本的采集21
• 2.2.2 大肠杆菌的分离培养21
• 2.2.3 大肠杆菌菌株的鉴定21-22
• 2.2.4 大肠杆菌致病性试验22
• 2.2.5 菌株的储存22
• 2.2.6 猪源致病性大肠杆菌最小抑菌浓度的测定22-24
• 2.2.7 猪源致病性大肠杆菌体外药敏试验24-25
• 2.2.8 猪源致病性大肠杆菌PMQR基因检测25-27
• 2.2.9 猪源致病性大肠杆菌接合实验27-29
• 3 结果29-45
• 3.1 猪源大肠杆菌的分离鉴定29-32
• 3.1.1 生化鉴定结果29-32
• 3.1.2 猪源大肠杆菌的致病性试验32
• 3.2 药敏试验数据32-38
• 3.3 猪源致病性大肠杆菌PMQR耐药基因的检测情况38-40
• 3.3.1 猪源致病性大肠杆菌PMQR基因检出情况38-39
• 3.3.2 猪源致病性大肠杆菌PMQR耐药基因凝胶电泳图39-40
• 3.4 猪源致病性大肠杆菌质粒接合试验情况40-45
• 3.4.1 接合子与供体菌耐药表型对比结果41-43
• 3.4.2 接合子菌株PMQR耐药基因检测结果43-45
• 4 讨论45-48
• 4.1 猪源致病性大肠杆菌药敏试验结果分析45-46
• 4.2 猪源致病性大肠杆菌PMQR基因检测分析46-47
• 4.3 接合子与亲本菌株耐药表型及基因型比对分析47-48
• 5 结论48-49
• 致谢49-50
• 参考文献50-57
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文57

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3 迟戈夫;;克雷伯氏菌引起婴儿腹泻的病原分离鉴定及耐药性检测[J];内蒙古民族大学学报(自然科学版);2005年06期

4 陈瑞;唐英春;朱家馨;李建国;彭湘民;;耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及分子流行病学研究[J];中华医院感染学杂志;2006年04期

5 温旺荣,戴庚孙;念珠菌耐药性的研究进展[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2001年01期

6 王朝晖,魏莲花;290例呼吸道感染患者嗜血杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J];甘肃科技;2003年09期

7 黎丽雯;邹立扣;周杨;胡苏;庞玉娟;;成都府河水体细菌动态变化及耐药性[J];湖泊科学;2012年01期

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9 吴志明;段建成;周全玲;;河南省畜禽几种主要致病菌的分离鉴定和耐药性检测[J];河南农业科学;2006年01期

10 石桂英;孙宗科;陈西平;;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测细菌耐药性的初步研究[J];卫生研究;2008年01期

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2 李羲;;肺癌耐药性检测与克服耐药性策略[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年

3 张健源;李传友;程君;;应用改良的耐药性检测法观察结核分枝杆菌耐药的动态变化[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

4 叶卫红;刘翠银;;268例革兰阴性杆菌肺炎的病原菌分布及耐药性监测[A];湖北省暨武汉市微生物学会分析微生物专业委员会第十届第五次学术会议论文汇编[C];2008年

5 王春光;张铁;韩伟;翟向和;李清艳;吕建存;;禽致病性大肠埃希菌的分离鉴定与耐药性监测[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年

6 管婧;卓超;苏丹虹;李红玉;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及基因分型分析[A];第8届全国抗菌药物临床药理学术会议暨北京大学临床药理研究所成立三十周年论文集[C];2010年

7 杨华;胡忠义;;变性高效液相色谱在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究[A];2006中国防痨协会全国学会会议论文集[C];2006年

8 肖二辉;石娜;陈永平;;2003-2008年我院细菌耐药性变化的分析[A];2009香港-北京-杭州内科论坛暨2009年浙江省内科学学术年会论文汇编[C];2009年

9 郭瑞林;苏冰;王小华;任忠良;张晓雪;;咸阳地区医院细菌感染发生率与耐药性监测研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

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1 北京市结核病胸部肿瘤研究所 韩喜琴;RFP和RBT耐药性与rpoB突变有关[N];中国医药报;2011年

2 ;中国建立基因型分析方法[N];中国高新技术产业导报;2002年

3 赵喜明;耐药细菌叫板声急[N];中国医药报;2004年

4 于海源;细菌对消毒剂也产生耐药性[N];中国医药报;2000年

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7 王庆福;氟苯尼考残留对细菌耐药性的影响[D];西南民族大学;2006年

8 刘e，

本文编号：608051