心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达

发布时间：2017-08-06 06:14

  本文关键词：心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达

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【摘要】：目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析其细胞表面标记物及检测体外向成骨细胞、成脂细胞、内皮细胞诱导分化潜能;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC定向分化成心肌样细胞;诱导细胞并同时转染p MLC2v-GFP,于d3,d7,d10,d14,d17及d21时间点在荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测其阳性率;用生物发光检测仪检测相同时间点的萤光素酶(p MLC2v-Luc)报告基因慢病毒载体转染分化细胞发光特征;在激光共聚焦显微镜下观察p MLC2v-GFP及红色荧光蛋白(RFP)共转染诱导21d后分化细胞蛋白的表达分布状况;与鼠心肌细胞作为对照,脉冲电流激发细胞收缩和细胞内及细胞间的钙离子流,以检测诱导分化细胞"兴奋-收缩"偶联功能;Western blot法检测诱导分化细胞p MLC2v蛋白的表达。结果:原代培养的P3 h UCMSC,经FCM检测CD90、CD105及CD73阳性率均为99%以上为高表达;获得的细胞分别经体外诱导能够向成骨细胞、成脂细胞、成内皮细胞分化;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC同时并转染p MLC2v GFP,在荧光显微镜下观察并用流式仪检测GFP表达阳性细胞数随诱导时间的延长而增加(P0.05);生物发光检测仪检测诱导细胞p MLC2v-Luc表达同样呈阳性递增;p MLC2v GFP及RFPC共转染诱导21d后分化的细胞,细胞浆内形成较清晰的与细胞长轴平行的肌束样结构;诱导后的细胞用共聚焦显微镜检测无细胞内及细胞间的钙离子流动;随诱导时间的延长p MLC2v蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:在h UCMSC体外诱导形成心肌样细胞过程中,p MLC2v基因随诱导时间的延长而表达增加,为监测干细胞的移植在心肌疾病治疗中提供了实验依据。
【作者单位】： 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室;首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所实验中心;中国人民解放军96669部队;首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科;
【关键词】： 人脐带胶样组织间充质干细胞 心肌样细胞 肌球蛋白轻链 荧光素酶 绿色荧光蛋白
【基金】：国家自然科学基金项目(81070077;81370228) 省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室(110267) 北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养资助项目(2014-3-045)
【分类号】：R542.2
【正文快照】： 作者单位:100029首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室(辛毅李娜许秀芳黄益民张颖),实验中心(崔巍刘飒),心内科(周玉杰);中国人民解放军96669部队(王超)目前心肌病是儿童期严重的疾病,患者常伴有持久的心肌细胞损伤和心力衰竭,目前尚

【参考文献】

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【共引文献】

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