人脑微血管内皮细胞ACTG1基因真核表达载体的构建及表达

发布时间：2017-08-13 07:00

  本文关键词：人脑微血管内皮细胞ACTG1基因真核表达载体的构建及表达

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【摘要】：为了构建人脑微血管内皮细胞ACTG1基因的真核表达载体及在HEK293细胞中的表达,本研究采用RT-PCR方法,以单增李斯特菌侵染的人脑微血管内皮细胞提取的总RNA为模板,扩增ACTG1基因片段,TA克隆后经Sal I和Eco R I双酶切、测序等鉴定重组质粒,重组质粒再经双酶切,与真核表达载体p ACGFP连接,酶切鉴定后,Lipofactamine 2000转染HEK293细胞,荧光显微镜检测绿色荧光;同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明:PCR扩增得到1128 bp的ACTG1基因片段,ACTG1-p ACGFP真核表达载体构建成功,转染24 h后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,Western-blotting检测分析,其分子量约为68 k Da的融合蛋白,与预期的大小相符合,表明重组蛋白表达成功,本研究为单增李斯特菌与脑微血管内皮细胞c DNA文库中相互作用蛋白的筛选和鉴定奠定了基础。
【作者单位】： 石河子大学动物科技学院;
【关键词】： 人脑微血管内皮细胞 ACTG基因 p ACGFP HEK细胞 单增李斯特菌
【基金】：国家自然科学基金项目(31160506)
【分类号】：R743
【正文快照】： 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)简称单增李斯特菌,是一种常见的食源性致病菌,广泛分布于自然界中,并能通过多种途径进入食品及食品加工环境,可以引起人和动物的李氏杆菌病(Listeriosis)。虽然该病发病率不高,但致死率可达20%-40%。在世界范围内已引起高度关

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

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【共引文献】

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1 高彭;梁和平;陈东宛;刘秀峰;王瑞霞;甄国新;黄晓凤;谈敦芳;孙雪媛;刘晓涛;;北京市顺义区食源性致病菌污染调查[J];现代预防医学;2009年14期

2 王发园;陈欣;;食品的微生物污染[J];中国农村小康科技;2009年04期

3 王安礼;刘长宏;马国柱;潘立;张芳;李雪梅;石一;;两类食品中三种致病菌和卫生细菌指标检测结果与分析[J];中国预防医学杂志;2009年02期

4 沈莹;;单核细胞增生性李斯特菌在食品安全中的研究近况[J];中国热带医学;2008年03期

5 朱献忠;;单核细胞增生性李斯特菌研究进展[J];中国卫生检验杂志;2007年07期

【二级参考文献】

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1 冯家望,吴小伦,黄云君,王小玉,薄清如,陈静静;食品中单核增生性李斯特菌的PCR快速检测研究[J];中国食品卫生杂志;2005年03期

2 刘秀峰,陈平,吴护华;单核细胞增多性李斯特菌病研究近况[J];实用预防医学;2001年01期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 卢宇;张旭;燕志强;王燕飞;郑龙燕;郭菲菲;程静;韩东一;陈晓巍;袁慧军;;外显子组测序一个常染色体显性遗传非综合征型聋家系致病基因ACTG1[J];中华耳科学杂志;2013年03期

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本文编号：665958