家蚕C-型凝集素11基因BmCTL11的克隆及表达分析

发布时间：2017-08-13 11:29

  本文关键词：家蚕C-型凝集素11基因BmCTL11的克隆及表达分析

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【摘要】：昆虫的C-型凝集素参与先天免疫系统中细胞间的相互作用,家蚕C-型凝集素11(C-type lectins,CTL11)基因BmCTL11是经家蚕微孢子虫(Nb)感染诱导后在蚕体内持续高量表达的基因。用生物信息学方法分析BmCTL11基因编码有307个氨基酸的多肽,预测分子质量34.51 kD,等电点4.69,含2个串联的典型C-型凝集素糖识别结构域,与烟草天蛾的IML-1蛋白进化距离最近。RT-PCR检测BmCTL11基因在家蚕幼虫时期的转录水平较高,并在多个组织有转录。将灭活的家蚕病原细菌、真菌、微孢子虫、病毒等注射家蚕5龄幼虫后的24 h内,qRT-PCR检测BmCTL11基因在幼虫脂肪体和中肠组织内的转录水平均发生上调,说明该基因能够被多种病原微生物诱导。以家蚕5龄第3天幼虫脂肪体c DNA为模板克隆了BmCTL11基因,连接到p ET-32a载体,诱导表达后将纯化的融合蛋白免疫昆明鼠制备出效价为1∶102 400的BmCTL11多克隆抗体。Western blot分析结果显示,BmCTL11蛋白可能以二聚体形式主要分布于家蚕脂肪体、血浆、中肠、表皮等组织中,推测BmCTL11在家蚕识别病原微生物并介导引发进一步的先天免疫反应过程中有重要的作用。
【作者单位】： 家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学;重庆师范大学生命科学学院;
【关键词】： 家蚕 C-型凝集素 基因克隆 表达谱 微生物诱导 多克隆抗体
【基金】：国家重大基础研究发展计划“973”项目(No.2012CB1146-04) 国家高技术研究发展计划“863”项目(No.2013AA1-02507) 西南大学基本科研业务费专项“创新团队”项目(No.XDJK2015A010)
【分类号】：S881.2;Q78
【正文快照】： 昆虫的先天免疫无论是细胞免疫还是体液免疫,首先需要对入侵病原微生物进行识别,在此过程中机体的免疫识别分子/受体能够识别并结合病原表面比较保守的被称为病原相关分子模式(PAMPs)的物质[1]。免疫识别分子/受体是昆虫先天免疫系统中的关键因子,由参与先天免疫的细胞合成与

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