刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析

发布时间：2017-08-17 19:10

  本文关键词：刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析

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【摘要】：目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。
【作者单位】： 武汉大学基础医学院医学遗传学系;武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室;
【关键词】： 刚地弓形虫 DXR 克隆表达 膦胺霉素
【基金】：中央高校基本科研业务费专项资金资助(No.2042015kf036)~~
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 中央高校基本科研业务费专项资金资助(No.2042015kf036)刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生的顶复门原虫。弓形虫病是一种危害十分严重的人兽共患寄生虫病[1]。目前,该病治疗尚无理想的特效药物,主要以乙胺嘧啶和磺胺类药物联合应用为主。寻求新型的活性高、

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本文编号：690612