苹果MpSnRK2.4基因的克隆及转化

发布时间：2017-08-17 20:20

  本文关键词：苹果MpSnRK2.4基因的克隆及转化

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【摘要】：【目的】从常用苹果砧木楸子中克隆MpSnRK2.4基因,并将其转化番茄(Lycopersicon esculentum)品种Micro-Tom,为研究其功能奠定基础。【方法】以楸子幼叶为材料,通过RT-PCR扩增获得MpSnRK2.4基因的完整开放阅读框序列;利用Gateway技术构建pGWB411-SnRK2.4植物过表达载体,通过根癌农杆菌介导法将此载体转入Micro-Tom番茄中,通过卡那霉素筛选和转基因番茄RT-PCR鉴定,获得阳性转基因株系,利用qRT-PCR技术研究不同转基因株系中MpSnRK2.4基因的表达水平。【结果】成功克隆到长度为1 220bp的MpSnRK2.4基因片段,该基因包含长1 026bp的完整开放阅读框,编码341个氨基酸残基。通过在线软件分析发现,该基因的gDNA序列包含8个内含子,9个外显子;预测编码蛋白MpSnRK2.4的分子质量为38.475ku,理论等电点(pI)为6.06。系统进化树分析表明,MpSnRK2.4与水稻OsSAPK3蛋白的亲缘关系最近,序列比对显示MpSnRK2.4蛋白与已知的其他植物SnRK2s蛋白序列具有较高的同源性。转基因植株PCR鉴定结果表明,MpSnRK2.4基因已成功转入番茄植株中,经qRT-PCR发现,不同转基因株系的MpSnRK2.4基因表达量存在差异,其中株系1的表达水平最高。【结论】克隆获得了MpSnRK2.4基因全长序列,并得到了10个含有该基因的Micro-Tom番茄转基因株系。
【作者单位】： 西北农林科技大学园艺学院;
【关键词】： 楸子 SnRK 基因克隆 转基因
【基金】：“十二五”国家科技计划项目“早中熟优质多抗苹果、梨新品种、砧木选育研究”(2013BAD02B01-2)
【分类号】：S661.1
【正文快照】： 蛋白质的可逆磷酸化是植物在非生物胁迫下体内能量代谢和信号转导的重要机制[1]。这个过程涉及到众多的磷酸酯酶和蛋白激酶,其中蔗糖非发酵相关蛋白激酶家族2(Sucrose non-fermenting-relat-ed protein kinase 2,SnRK2)是一个相对较小的植物专一性丝氨酸/丝氨酸蛋白激酶家族。

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：690912