超声联合声诺维微泡介导wtp53基因转染鼠胶质瘤C6细胞的实验研究

发布时间：2017-08-18 15:38

  本文关键词：超声联合声诺维微泡介导wtp53基因转染鼠胶质瘤C6细胞的实验研究

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【摘要】：目的脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,约占颅内肿瘤的40%-60%。由于其侵袭特性及由低级别向高级别转化的趋势,使得手术治疗难以根治肿瘤,且放疗和化疗效果不佳,术后复发率高,预后差,死亡率高。而癌基因、抑癌基因在肿瘤的发生发展过程中发挥了重要作用,其中原癌基因的激活与抑癌基因的失活使其对细胞周期及细胞凋亡的调节失控。野生型p53(wtp53)作为一种常见的抑癌基因,其主要生物学功能是通过一系列信号转导通路调节细胞周期及诱导细胞凋亡来维持细胞基因组的稳定性,从而抑制肿瘤的发生。本文旨在探讨超声靶向破坏微泡(UTMD)技术增强wtp53基因转染鼠胶质瘤C6细胞的可行性,同时对该转染体系的微泡浓度、质粒浓度等参数进行优化。方法将体外培养的鼠胶质瘤C6细胞悬液分为空白对照组、质粒+超声组、质粒+微泡组、超声+微泡组、质粒+超声+微泡组;并将质粒+超声+微泡组按微泡浓度分为5%、10%、20%、30%、40%;再按质粒浓度分为5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、30μg/ml。辐照条件:采用频率1MHz、声强0.8W/cm2、占空比20%、持续时间50s。在37℃、5%CO2条件下培养24h-48h,用荧光显微镜观察细胞转染率、台盼蓝染色法检测细胞存活率、逆转录PCR(RT-PCR)检测胶质瘤C6细胞中的wtp53 m RNA表达量、流式细胞仪检测C6细胞凋亡百分比及细胞周期分布。结果1、微泡浓度为20%、30%时,细胞转染效率较高,但微泡浓度为30%的C6细胞存活率比微泡浓度为20%的降低,且有统计学意义(P0.05)。质粒浓度为15μg/ml时,细胞转染效率最高(P0.05),而C6细胞存活率有所下降(P0.05);质粒浓度为20μg/ml、30μg/ml时细胞存活率显著下降(P0.01)。因此,微泡浓度20%、质粒浓度15μg/ml为该转染体系最佳参数。2、UTMD作为一种安全有效的转染方法,目的基因可以在细胞内稳定表达,并发挥其相关效应。超声+微泡组的细胞存活率与其他组相比(除质粒+超声+微泡组),差异无统计学意义(P0.05)。与其他组比较,质粒+超声+微泡组细胞存活率的降低有统计学意义(P0.05);质粒+微泡+超声组的转染效率最高,转染细胞中的wtp53 m RNA的表达量增多,流式细胞仪分析细胞凋亡百分比明显增高,细胞周期G0/G1期细胞数增多(P0.05)。结论UTMD可增强p EGFP-C1-wtp53在鼠胶质瘤C6细胞系中的转染,且wtp53基因可进行稳定表达。
【关键词】：超声 微泡 wtp53基因 胶质瘤 转染
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41;R445.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文缩略语对照表11-12
• 第一部分 超声联合声诺维微泡介导pEGFP-C1-wtp53质粒转染胶质瘤C6细胞的参数优化12-29
• 1 前言12-14
• 2 材料与方法14-20
• 3 实验结果20-21
• 4 讨论21-24
• 5 小结24-25
• 附图25-27
• 参考文献27-29
• 第二部分 超声联合声诺维微泡介导wtp53基因转染鼠胶质瘤C6细胞的实验研究29-54
• 1 前言29-32
• 2 材料与方法32-41
• 3 实验结果41-43
• 4 讨论43-46
• 5 小结46-47
• 附图47-51
• 参考文献51-54
• 综述 超声微泡造影剂的应用进展54-66
• 参考文献63-66
• 个人简历和在校期间发表论文66-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 刘忠华;刘贻尧;杨红;;超声空化效应和超声微泡在生物医学中的应用[J];生物技术通讯;2008年03期

2 赵应征,张彦;微泡超声造影剂的研究进展[J];国外医学.药学分册;2003年05期

3 程黎明,王思元,林菊生;PTEN和p53蛋白在肝癌组织中的表达及意义[J];癌症;2003年01期

4 刘政,谢峰,李澎,王红,刘梅,简文豪;肝脏VX_2肿瘤声学造影的动态变化时相[J];中华超声影像学杂志;2000年06期

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本文编号：695379