猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究

发布时间：2017-08-18 16:43

  本文关键词：猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究

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【摘要】：为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000bp,在707/892位点序列为G/G,将构建的真核表达载体MC4R1转染BHK细胞,经过Western blotting检测发现MC4R1蛋白正常表达;通过点突变法得到在707/892位点突变的突变载体MC4R2(G/A)、MC4R3(A/G)、MC4R4(A/A),经过激光共聚焦观察荧光表达后发现,突变受体在细胞膜上均有正常表达,流式检测发现4个突变受体表达的荧光平均强度并没有显著差异(P0.05)。通过构建MC4R基因突变载体后发现,707/892位点突变对于MC4R受体在细胞膜的表达没有显著影响,其具体机制作用还需深入研究。
【作者单位】： 河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室;华中农业大学教育部动物遗传育种与繁殖重点实验室;河南省现代畜牧业协同创新中心;
【关键词】： 猪 黑素皮质素受体- 突变体 表达
【基金】：农业部“引进国际先进农业科学技术”(948)重点项目(2011-G35) 国家转基因重大专项(2014ZX0801015B) 郑州市科技攻关项目(141PPTGG430)
【分类号】：S828
【正文快照】： 与繁殖重点实验室,武汉430070;3.河南省现代畜牧业协同创新中心,郑州450002)随着分子生物学技术的飞速发展,分子标记辅助选择和全基因选择育种方式越来越受关注,而对于控制动物性状的功能基因的筛选和深入研究也成为热点,黑素皮质素受体-4(MC4R)基因是猪育种的重要候选基因[1]

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本文编号：695648