原油污染土壤降解细菌的分离鉴定与污染物的生物降解研究

发布时间：2016-09-26 14:22

  本文关键词：石油降解菌的分离鉴定及石油污染土壤的细菌多样性，由笔耕文化传播整理发布。

《东北林业大学》 2010年

原油污染土壤降解细菌的分离鉴定与污染物的生物降解研究

屠明明  

【摘要】： 随着工业化的发展,土壤的石油污染问题日益严重,石油污染物的处理已成为世界各国亟待解决的环境问题。由于生物修复具有高效、安全、成本低、无二次污染等诸多优点而成为近些年来主要的石油污染土壤的处理方法。其中,本土微生物强化修复方法则成为近年来的研究热点。 本文从分离微生物入手,通过摇瓶培养和土壤固体培养筛选出高效的石油降解菌株,对其进行初步的鉴定,并对影响降解菌株生长和石油降解效率的三种相关因素进行研究,以确定各菌株在摇瓶培养条件下的最适生长和石油降解条件。 通过研究得到如下结果： 1、从四种石油污染土壤样品中分离出六种细菌,分别命名为X3、X5、X8、X9、4号②和5号①。 2、无机盐培养基摇瓶培养条件下,实验进行15天后,X3、X5、X8、X9、4号②和5号①菌株对原油(10g/L)的降解率分别达到57.37%、59.09%、46.94%、31.33%、38.51%和49.28%,均远远高于对照组的降解率(21%)。 土壤榨取液培养基摇瓶培条件下,实验进行7天后,X3、X5、X8、X9、4号②、5号①菌株对原油(10g/L)的降解率分别达49%、50.08%、39.10%、24.85%、31.12%和39%,处理效果比较理想。 土壤固体培养基培养条件下,实验进行15天后,X3、X5、X8、X9、4号②、5号①菌株对原油(1%)的降解率分别达到75%、72%、64.34%、68%、64.67%和59%,虽然各个菌株之间的降解效率略有不同,但均处于较高水平,远远高于对照组。 3、通过生理生化分析和16SrDNA全序列分析,可初步确定X3菌株为Pseudomonas sp.(假单胞菌属)；X5菌株为Pseudomonas aeruginosa(铜绿假单胞菌属)；X8菌株为Acinetobacter junii(琼氏不动杆菌属)；X9菌株为Acinetobacter junii(琼氏不动杆菌属)；4号②菌株为Microbacterium oxydans(微杆菌属)；5号①菌株为Pseudomonas aeruginosa(铜绿假单胞菌属)。 4、通过改变初始盐浓度、N源和P源,初步探测各菌株的最适生长和降解条件,结果发现：对于X3、4号②和5号①菌株来说,在最适盐浓度为1%;而X5、X8和X9菌株最适盐浓度为3%。对于X3、X5和5号①菌株来说最适N源为NH4NO3;对于X8菌株来说最适N源为NH4Cl；而对于X9和4号②菌株来说最适N源为(NH4)2S04。对于所有菌株来说最适P源均为K2HPO4·3H2O/KH2PO41:1。 本研究为本土微生物强化的生物修复方法提供了新的菌种资源和信息,对进一步有效实现本土微生物强化具有重要意义。

【关键词】：
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：X172;X53
【目录】：

摘要4-5

Abstract5-9

1 绪论9-16

1.1 石油污染概况9

1.2 石油污染的危害9

1.3 石油污染的处理方法9-10

1.4 石油污染土壤微生物修复的研究进展10-14

1.4.1 生物刺激10-11

1.4.2 生物强化11-14

1.5 细菌鉴定14-15

1.6 研究的目的和意义以及研究内容15-16

1.6.1 研究的目的和意义15

1.6.2 研究的内容15-16

2 石油降解菌株的分离16-18

2.1 材料16

2.1.1 石油污染土壤样品16

2.1.2 原油16

2.1.3 实验所需培养基16

2.2 实验方法16-17

2.2.1 细菌的富集16-17

2.2.2 细菌的分离、纯化17

2.3 结果与讨论17

2.3.1 细菌的富集17

2.3.2 细菌的分离、纯化17

2.4 本章小结17-18

3 石油降解菌株的降解性能测定18-29

3.1 材料18

3.1.1 原油18

3.1.2 实验所需培养基18

3.2 实验方法18-19

3.2.1 无机盐培养基培养条件下降解性能的测定18

3.2.2 土壤榨取液培养基培养条件下降解性能的测定18

3.2.3 培养液中原油的萃取18-19

3.2.4 固体培养条件下降解性能测定19

3.2.5 土壤中原油的萃取19

3.3 实验结果19-27

3.3.1 无机盐培养基摇瓶培养条件下的降解结果19-23

3.3.2 土壤榨取液培养基摇瓶培养条件下的降解结果23-24

3.3.3 固体培养条件下的降解结果24-27

3.4 讨论27-28

3.5 本章小结28-29

4 石油降解菌株的鉴定29-47

4.1 材料29

4.1.1 试剂29

4.1.2 实验所用培养基29

4.2 实验方法29-31

4.2.1 细菌生理生化鉴定实验29-30

4.2.2 细菌16SrDNA鉴定30-31

4.3 实验结果31-46

4.3.1 各菌株的特征吸收波长扫描31-34

4.3.2 生理生化鉴定试验34

4.3.3 耐盐性试验34-35

4.3.4 耐酸碱性试验35-37

4.3.5 细菌16SrDNA鉴定结果37-46

4.4 讨论46

4.5 本章小结46-47

5 细菌生长条件优化47-53

5.1 材料47

5.1.1 菌种47

5.1.2 实验所用培养基47

5.2 实验方法47

5.2.1 初始盐浓度对菌生长及石油降解率的影响47

5.2.2 氮源对菌生长及石油降解率的影响47

5.2.3 磷源对菌生长及石油降解率的影响47

5.3 实验结果47-52

5.3.1 初始盐浓度对菌生长及石油降解率的影响47-50

5.3.2 氮源对菌生长及石油降解率的影响50-51

5.3.3 磷源对菌生长及石油降解率的影响51-52

5.4 讨论52

5.5 本章小结52-53

结论53-55

参考文献55-59

攻读学位期间发表的学术论文59-60

致谢60-61

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