高效石油降解菌的筛选及石油污染土壤生物修复特性的研究

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4期徐金兰等:高效石油降解菌的筛选及石油污染土壤生物修复特性的研究623

壤中投加环境适应强、降解效能高的菌种或菌群是提高石油污染土壤生物修复效率的主要手段.在这方面已取得一定的研究成果,例如美国BGI公司的一项专利技术就是利用混合菌群来促进石油烃的降解(BalticGeneralInvestmentCorporation,1996);Wilson等的论文中也报道了几种对PAHs发挥高效降解能力的菌株(Wilsonetal,1993).但污染土壤的

石油降解菌的复筛:称取含油土样50g,溶于经灭菌的培养基100mL中,配成泥浆,盛于250mL的三角瓶中;在无菌条件下,将制好的菌悬液接种2mL于三角瓶中,各菌种均做3个平行样,并作加氯化汞杀菌和不加菌2种空白对照.在30℃、160r min条件下于摇床中培养.每2d取1次样,测其石油烃含量,直至其石油烃含量不再有明显变化,筛选出石油烃降解率高的菌种.接种量影响试验的操作方法与菌种复筛的方法相同,不同的是改变接种量和试验土样.样点1、样点2、样点3、样点4的泥浆中石油

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烃浓度分别为125mg L、mg L、3245

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mg L、209mg L.

2kg于,23、SY43进行活化,与(,接入石油污染20%左右,在自然.2.4　测试项目及方法

石油烃的测定:采用非分散红外石油仪测定(中华人民共和国国家标准GB/T1648821996,1996).

微生物计数:采用平板计数测定泥浆中石油降解菌的数量(俞毓馨等,1990).33.1

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微生物修复是一项涉及污染物特性、微生物生态结构和环境条件的复杂系统工程,高效降油菌对环境的适应性及其对石油的分解特性都会影响生物修复过程.本文从陕北石油污染土样中筛选高效降油菌株,对其形态及生理特征进行研究,并进行初步鉴定;研究菌株的除油特性及部分菌株的生物修复过程,以期为工程实际提供理论依据.22.1

材料和方法(Materialsandmethods)

原油和石油污染土壤

,,其特性见表1表1

Table1

采集石油污染土壤的特性

Thecharacteristicsofoil2contaminatedsoil

编号样点1样点2样点3样点4

总烃浓度/(mg kg-1)

20914828100572

细菌数量/(个 g-1)

pH

含水率

好氧细菌

石油降解菌

1.3×1035.6×1032.2×1041.0×105

结果(Results)

8.898.3%9.2×1031.3×1054.4×1043.4×105

8.6615.5%8.5513.9%8.9115.1%

高效降油菌的筛选

为了取得高效、彻底的生物修复效果,分离和筛选污染物的高效降解菌种是生物修复的必然要求.本试验从陕北长庆油田石油污染土壤中共获得60个试样,经过3次富集培养以及分离纯化等步骤

2.2　培养基

培养基:NH4NO32g,K2HPO41.5g,KH2PO43g,MgSO4 70H2O0.1g,无水CaCl20.01g,Na2EDTA 2H2O0.01g,原油1g,蒸馏水:1000mL,pH值7.2～7.4.2.3　操作方法

石油降解菌的富集、分离、纯化:取一定量的石油污染土样接入装有100mL培养基的250mL三角

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瓶中,于30℃、160r min条件下在摇床中培养7d;然后取一定量的上述培养液接入装有100mL新鲜培养基的250mL三角瓶中,30℃、160r min条件下摇床中培养7d;如此共3次.用接种环沾取富集培养液于平板上划线;经过多次划线纯化后,将纯化菌株于试管斜面培养后保存于冰箱(梁生康等,2004).

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得到45个单菌株.在此基础上,采用降解石油试验,复筛出7株对石油具有较高降解能力的菌株.表2列出了这7株菌在石油培养基中的生长状况、培养7d时细菌密度、细菌除油率及菌落生长特征.从表2可以看出,7株菌在石油培养基介质中生长良好,对原油可产生一定乳化作用;培养7d时的细菌密度可

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达10～10个 mL,表明7株菌可以利用石油为唯一碳源生长;培养7d后的生物除油率为43.8%～58.9%,高于石油降解菌B01对胜利油田石油类的降解率(25.8%～32.8%)(林凤翱等,1997),与O2823假单胞菌属、海洋细菌SJ206W、SJ26及SJ216A22对石油类的降解率相当(40.89%～57.65%)(梁生康等,2004;丁明宇等,2001).

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