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基于适体生物传感器的碱性磷酸酯酶化学发光检测腺苷

发布时间:2020-02-03 17:47
【摘要】:制备了一种可用于腺苷检测的适体生物传感器,以羧基磁性微球为载体,在其表面组装腺苷适体与地高辛修饰之腺苷适体互补的核酸短链,先加入一定浓度的腺苷,再连接抗地高辛的碱性磷酸酯酶,用化学发光法检测发光值,根据腺苷加入前后化学发光强度的变化来定量检测腺苷。实验考察了羧基磁性微球用量、氨基修饰的腺苷适体用量、地高辛修饰的核酸短链用量及抗地高辛的碱性磷酸酯酶用量对体系组装和腺苷识别的影响。结果显示,优化条件下,在1.0×10~(-7)~1.0×10~(-3)mol/L范围内,腺苷浓度的对数与发光信号呈线性关系(r~2=0.976 9),定量下限为1.0×10~(-7)mol/L。与其他核苷相比,腺苷的选择特异性更好,且在稀释血清中适体对腺苷有很好的特异性识别能力。
【图文】:

示意图,化学发光检测,腺苷,示意图


第4期严喜鸾等:基于适体生物传感器的碱性磷酸酯酶化学发光检测腺苷567也为进一步优化适体用量以及报告序列用量研究奠定了基矗随后详细考察了反应所用羧基磁性微球、氨基修饰的适体、报告序列以及抗地高辛-ALP的量对CL信号的影响。图1腺苷的化学发光检测示意图Fig.1Schematicpresentationofadenosinechemiluminescentanalyticalprotocol2.1.1羧基磁性微球的用量考察了羧基磁性微球用量(20,30,40,50,60,80μg)对CL信号值的影响。结果显示,羧基磁性微球用量为40μg时,CL信号值最大,之后信号随其用量的增加反而下降,这是由于过量的磁性微球虽然为氨基适体增加了连接位点,但磁性微球量的增多对发光信号有吸收,反而使CL信号值降低,故实验选择40μg为羧基磁性微球的最佳用量。图2氨基修饰的腺苷适体量的优化选择(n=3)Fig.2Optimalselectionofamountofaminomodifiedadenosineaptamer(n=3)2.1.2腺苷适体的用量考察了不同的氨基修饰腺苷适体用量(1.0,1.5,3.0,8.0,10pmol)对CL信号值的影响,结果如图2所示。当腺苷适体用量为1.5pmol时,CL信号值最大,之后随其用量增加反而下降,这是由于随着氨基适体量的增加,羧基磁性微球上连接的适体也增多,增大了空间位阻,导致结合的报告序列量减少,降低了CL信号值,故实验选择1.5pmol为腺苷适体的最佳用量。2.1.3报告序列的用量考察了报告序列用量(20,30,40,60,80fmol)对CL信号值的影响,结果显示,在10~60fmol时,CL信号随报告序列用量的增加而急剧增加,60fmol时CL信号值达到最高值,之后随着报告序列用量的增加,CL信号反而下降。这是由于适体量是固定的,当报告序列的用量达到与适体结合的饱和点后,过多的报告序列反而会影响适体与报告序列的结合,导致CL信号值下降,故实验

氨基修饰,腺苷,信号值,用量


颉?氨基修饰的适体、报告序列以及抗地高辛-ALP的量对CL信号的影响。图1腺苷的化学发光检测示意图Fig.1Schematicpresentationofadenosinechemiluminescentanalyticalprotocol2.1.1羧基磁性微球的用量考察了羧基磁性微球用量(20,30,40,50,60,,80μg)对CL信号值的影响。结果显示,羧基磁性微球用量为40μg时,CL信号值最大,之后信号随其用量的增加反而下降,这是由于过量的磁性微球虽然为氨基适体增加了连接位点,但磁性微球量的增多对发光信号有吸收,反而使CL信号值降低,故实验选择40μg为羧基磁性微球的最佳用量。图2氨基修饰的腺苷适体量的优化选择(n=3)Fig.2Optimalselectionofamountofaminomodifiedadenosineaptamer(n=3)2.1.2腺苷适体的用量考察了不同的氨基修饰腺苷适体用量(1.0,1.5,3.0,8.0,10pmol)对CL信号值的影响,结果如图2所示。当腺苷适体用量为1.5pmol时,CL信号值最大,之后随其用量增加反而下降,这是由于随着氨基适体量的增加,羧基磁性微球上连接的适体也增多,增大了空间位阻,导致结合的报告序列量减少,降低了CL信号值,故实验选择1.5pmol为腺苷适体的最佳用量。2.1.3报告序列的用量考察了报告序列用量(20,30,40,60,80fmol)对CL信号值的影响,结果显示,在10~60fmol时,CL信号随报告序列用量的增加而急剧增加,60fmol时CL信号值达到最高值,之后随着报告序列用量的增加,CL信号反而下降。这是由于适体量是固定的,当报告序列的用量达到与适体结合的饱和点后,过多的报告序列反而会影响适体与报告序列的结合,导致CL信号值下降,故实验选择60fmol为报告序列的最佳用量。2.1.4抗地高辛-ALP酶的稀释倍数考察了不同稀释倍数的抗地高辛-ALP酶的用量(1∶3000~1∶12000)对CL信号值的影响,结果显示

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本文编号:2576079

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