基于TdT酶和RCA两种等温核酸扩增技术构建用于检测恩诺沙星的适体传感器
发布时间：2021-04-10 05:53
恩诺沙星（Enrofloxacin,ENR）为人工合成的氟喹诺酮类抗菌药物,被广泛用于多种动物感染性疾病的预防和治疗。近多年来,RNR在水生动物疾病的防治中应用愈来愈多。然而ENR的大量使用,可能造成其在动物源食品中的残留,严重影响到人类的身体健康。传统的检测方法中,高效液相色谱等检测,需要复杂的样品前处理,贵重的大型仪器,耗时较久。本研究中将ENR的核酸适配体组装在纳米金（Au nanoparticles,AuNPs）表面作为识别纳米生物探针,结合磁珠（Microbeads,MBs）分离技术构建针对ENR的适配体传感器（aptasensor）。首先通过末端脱氧核糖核酸转移酶（Terminal deoxynucleotidyl transferase,TdTase）介导的常温下纳米界面DNA的生长,实现针对ENR的信号响应,建立一种简单易操作的检测分析方法。其次,本研究中结合TdTase介导的纳米界面DNA的生长和RCA扩增技术,实现了一种新型的TdT生成的具有通用引物的RCA的传感分析方法,用于定量检测ENR。本论文主要包括以下三个部分:（1）首先参照经典的还原法制备粒径15 nm的...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
指数富集指数富集的配体系统进化技术示意图
图 1-2 基于核酸配体的生物传感器原理示意图Fig. 1-2 Structure diagram of aptasensors1.2.3 核酸适配体生物传感器的应用从 2004 年起到今天，核酸适配体已经引起了研究者的广泛关注。适配体的开发与利用极大地推动了生物传感技术的研究与和发展。使得检测对象从单一的模板分子如凝血酶、三磷酸腺苷等不断的拓展为更具有实际意义的靶标物如肿瘤标
并被广泛用于开发各种 ATP 检测方法。1.2.3.1 比色法基于纳米金或者纳米银等纳米颗粒的比色法作为一种灵敏直观的检测手段，因为简单、无需特别的专业操作技术。可以根据观察纳米颗粒的团聚所体现出的颜色变化进而直观、便捷地实现对靶分子的快速检测，因此在分析领域的应用非常广泛。针对于小分子的检测 Chen 等人（如图 1-3（a））借助未经改性的金纳米粒子和 DNA 适配体制备了一种通过裸眼可以直接观察，通过紫外可见分光光度计表征来检测 AuNPs 颜色变化的适体传感器，用于无标记磺胺地索辛(SDM) 的检测，该策略对 SDM 的检测限为 50ng/mL，此结果远低于中国和欧盟等地区对动物组织里面 SDM100ng/mL 最大残留量的要求。Liu 等人（如图 1-3（b））的团队依照靶分子灭蝇胺的结构特性设计了一段高亲和性适配体 polyT10，通过和金纳米颗粒结合，进而构建了一种针对于灭蝇胺的高灵敏度比色法检测。该传感器的 LOD 和 LOQ分别为252ng/g和500ng/g。此结果符合我国对灭蝇胺的最大残留限量要求(MRLs)，使得该策略能够在黄瓜中得到成功应用。
本文编号：3129088
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
指数富集指数富集的配体系统进化技术示意图
图 1-2 基于核酸配体的生物传感器原理示意图Fig. 1-2 Structure diagram of aptasensors1.2.3 核酸适配体生物传感器的应用从 2004 年起到今天，核酸适配体已经引起了研究者的广泛关注。适配体的开发与利用极大地推动了生物传感技术的研究与和发展。使得检测对象从单一的模板分子如凝血酶、三磷酸腺苷等不断的拓展为更具有实际意义的靶标物如肿瘤标
并被广泛用于开发各种 ATP 检测方法。1.2.3.1 比色法基于纳米金或者纳米银等纳米颗粒的比色法作为一种灵敏直观的检测手段，因为简单、无需特别的专业操作技术。可以根据观察纳米颗粒的团聚所体现出的颜色变化进而直观、便捷地实现对靶分子的快速检测，因此在分析领域的应用非常广泛。针对于小分子的检测 Chen 等人（如图 1-3（a））借助未经改性的金纳米粒子和 DNA 适配体制备了一种通过裸眼可以直接观察，通过紫外可见分光光度计表征来检测 AuNPs 颜色变化的适体传感器，用于无标记磺胺地索辛(SDM) 的检测，该策略对 SDM 的检测限为 50ng/mL，此结果远低于中国和欧盟等地区对动物组织里面 SDM100ng/mL 最大残留量的要求。Liu 等人（如图 1-3（b））的团队依照靶分子灭蝇胺的结构特性设计了一段高亲和性适配体 polyT10，通过和金纳米颗粒结合，进而构建了一种针对于灭蝇胺的高灵敏度比色法检测。该传感器的 LOD 和 LOQ分别为252ng/g和500ng/g。此结果符合我国对灭蝇胺的最大残留限量要求(MRLs)，使得该策略能够在黄瓜中得到成功应用。
本文编号：3129088
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