基于可变数目串联重复序列的痰液结核分枝杆菌检测方法建立及初步应用
本文关键词：基于可变数目串联重复序列的痰液结核分枝杆菌检测方法建立及初步应用
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【摘要】：目的:传统的核酸扩增(nucleic acid amplification,NAA)技术检测结核分枝杆菌(Mycobacterial tuberculosis,MTB),因其简单快捷、灵敏度高被临床上大量使用,但该技术检测结果假阳性率高的缺陷,是其应用于结核病临床检验诊断的重大挑战。本研究首次利用结核分枝杆菌散在分布单元——数目可变串联重复基因序列(mycobacterial interspersed repetitive unit variable number of tandem repeat,MIRU-VNTR)的分布特点,采用PCR技术直接对痰液样本进行基因扩增,以检测痰液标本MTB并进行相关质量控制,通过特异度、灵敏度等指标的临床性能评价,为该方法在临床的进一步推广应用奠定实验基础。方法:根据扩增条件及临床检测实际需要,优化选择VNTR位点MTUB21,MTUB04,QUB-18,QUB-26,QUB-11b,MIRU31,MIRU10和MIRU26作为检测靶标,建立可直接用于临床痰液标本检测的方法,收集130例肺MTB患者和200例非结核患者(其它肺部疾病)的临床痰液样本,分别用MIRU-VNTR法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法对上述样本进行检测,两种检测方法结果与罗氏培养法、临床诊断进行比较分析。结果:以罗氏培养法为金标准时,MIRU-VNTR法的灵敏度为93.1%(108/116),特异度为97.7%(209/214),FQ-PCR法的灵敏度为94.0%(109/116),特异度为96.7%(207/214),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法检测结果无统计学差异(χ2=0.352,P=0.569㧐0.05)。以临床诊断为金标准时,MIRU-VNTR法的灵敏度为86.9%(113/130),特异度为100%(200/200),FQ-PCR法的灵敏度为87.7%(114/130),特异度为99.0%(198/200),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法检测结果无统计学差异(χ2=0.030,P=0.862㧐0.05),但MIRU-VNTR法未发现假阳性结果。在MIRU-VNTR法检测为阳性的结果中,98.2%(111/113)的样本分子编码互不相同,只有1.8%(2/113)分子编码一致(皆为5-4-6-8-5-5-3-8),对此2例编码一致的样本,经过重复检测,结果表明此2例病人的确携带MTB,并非由于交叉污染所致。结论:与传统FQ-PCR方法比较,MIRU-VNTR检测方法灵敏度、特异度均无显著差异,MIRU-VNTR法的优势在于,通过赋予每例样本特定的指纹信息,使不同样本的阳性结果能区分开来,很好控制检测结果的假阳性率。本研究表明MIRU-VNTR可用于临床MTB的诊断,初步显示有较好的临床诊断价值。
【关键词】：结核 肺 数目可变串联重复序列
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R440;R52
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照4-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-10
- 前言10-11
- 1 材料与方法11-18
- 2 结果18-27
- 3 讨论27-30
- 全文总结30-31
- 参考文献31-35
- 文献综述35-45
- 参考文献40-45
- 致谢45-46
- 攻读硕士学位期间文章发表及发明专利46-47
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，本文编号：1049997
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