常州地区抗酸杆菌菌种鉴定及耐药性研究

发布时间：2017-11-05 04:29

  本文关键词：常州地区抗酸杆菌菌种鉴定及耐药性研究

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【摘要】：目的:通过对常州地区收集标本的抗酸杆菌进行菌种鉴定并开展药敏结果分析,了解该区域抗酸杆菌菌型分布及其耐药情况,并对其耐药原因进行分析,拟为该区域肺结核和NTM肺病的诊断与鉴别诊断、合理用药提供参考。方法:1.收集2011年04月~2013年03月常州专科医院进行抗酸杆菌菌种鉴定和耐药性研究的标本400份,其中300份为痰液,70份为胸腹水,30份为支气管肺泡灌洗液。2.采用NaOH-NaCl标本处理法对400份标本进行标本预处理。细菌学检测方法进行菌型和耐药性鉴定:(1)菌种鉴定:标本采用BacT/Alert 3D系统进行分离培养,分别做抗酸染色和革兰染色。抗酸染色为阳性标本进一步采用Gen-Probe分子生物学诊断的AccuProbe探针检测试剂盒检测,完成NTM和MTB的菌群检测和鉴定。(2)耐药试验:对分枝杆菌培养阳性的菌株采用绝对浓度法对六种抗结核药物:INH(异烟肼)、RFP(利福平)、EMB(乙胺丁醇)、SM(链霉素)、LFX(左氧氟沙星)、AMK(丁胺卡那)进行药敏试验(每一种药物有低、高两种浓度)。3.基因芯片检测方法:采用基因芯片检测利福平耐药基因rpoB位点所包含的6个基因变化情况,及异烟肼耐药基因KatG和inhA基因启动子各1个位点。对标本进行核酸提取,PCR扩增及杂交进行抗酸杆菌的分离及菌种鉴定:采用LuxScan10k-B微阵列芯片扫描仪,并运行配套的芯片判别系统,对芯片进行扫描和结果判读。记录判读结果和芯片信息。结果:1.标本细菌学检测结果:400例可疑标本中,191例可疑标本为抗酸杆菌阳性菌株,209例可疑标本为阴性标本;191例抗酸杆菌阳性菌株中175例抗酸杆菌培养阳性菌株为mtb菌株(91.62%);16例抗酸杆菌菌株为ntm(8.38%)。2.耐药结果:(1)mtb与ntm耐药情况比较:175例mtb对6种抗结核药全部敏感比例高达63.43%,对各药的耐药情况为16.57%对inh耐药,12.00%对rfp耐药,9.14%对emb耐药,16.00%对sm耐药,15.43%对lfx耐药,9.14%对amk耐药;而ntm对常用的该6种抗结核药物敏感率较低,敏感比例仅23.08%;16例ntm菌株中仅有13例有耐药结果,该13例ntm菌株中76.92%对inh耐药,38.46%对rfp耐药,53.85%对emb耐药,61.54%对sm耐药,61.54%对lfx耐药,46.15%对amk耐药。(2)mtb与ntm对不同浓度药物敏感性存在的差异性:175例mtb中对inh、rfp、emb、sm、lfx、amk6种抗结核药,低浓度耐药率最高的为lfx,耐药率为17.42%,其次依次为emb7.30%,inh7.30%,amk6.18%,sm5.62%,rfp5.06%;而13例ntm对以上6种抗结核药呈现普遍耐药,其中低浓度耐药率最高的为emb,低浓度耐药率高达50.00%,其次依次为lfx41.67%,sm33.33%,inh25.00%,amk25.00%,rfp16.67%。3.基因芯片检测:(1)菌种鉴定:191例抗酸杆菌阳性标本基因芯片法检测阳性率100%;209例阴性标本中检测出mtb5例、ntm2例。(2)耐药基因检测:191例抗酸杆菌阳性标本采用基因芯片检测耐利福平与传统耐药分析检测一致率为90.1%(172/191)、耐利福平检测的敏感性为79.3%(23/29)、特异性为98.2%(159/162)、阳性预测值为88.5%(23/26)、阴性预测值为96.4%(159/165)。191例抗酸杆菌阳性标本采用基因检测耐异烟肼与传统耐药分析检测一致率为93.7%(179/191);耐异烟肼检测敏感性为87.1%(34/29)、特异性为95.4%(145/152)、阳性预测值为82.9%(34/41)、阴性预测值为96.0%(145/151)。191例抗酸杆菌阳性标本耐多药基因检测与传统耐药分析检测一致率为96.7%(173/191);耐多药检测敏感性为86.7%(52/60)、特异性为92.4%(121/131)、阳性预测值为83.9%(52/62)、阴性预测值为93.8%(121/129)。结论:1.常州地区抗酸杆菌检出以mtb为主,分离率高于全国水平,ntm分离率低于全国水平。2.基因芯片法与传统细菌菌种鉴定及耐药性鉴定具有较高的符合率,且有快速、高效、特异等优点,为临床可以使用的检测方法之一。3.不同标本中,支气管肺泡灌洗液检测抗酸杆菌阳性和耐多药检出率较高,其次是痰液和胸腹水。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5

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本文编号：1142611