奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶多克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-11-29 10:11

  本文关键词：奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶多克隆抗体的制备和鉴定

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【摘要】：目的表达、纯化奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶(PPK)蛋白,制备PPK多克隆抗体。方法利用分子生物学软件分析奇异变形杆菌PPK的抗原性、疏水性等参数,选取N端较保守的309个氨基酸,并对其基因序列进行密码子优化以利于原核表达。合成新的基因序列后插入pET28b(+)质粒,转化入转化宿主菌BL21(DE3),诱导、表达融合蛋白。通过镍琼脂糖亲和层析技术,将获得的融合蛋白进行纯化。以纯化的蛋白作为免疫原并结合使用佐剂,背部多点注射新西兰大白兔,ELISA检测兔血清效价,Western Blotting验证抗体特异性。结果成功构建了奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒,可在0.5 mmol/L IPTG、37℃条件下获得较好的诱导、表达;利用镍柱纯化后的PPK蛋白与免疫佐剂一起,采用背部多点接种新西兰大白兔,制备了效价高的兔抗血清。ELISA检测血清效价达到1∶512 000,Western Blotting对ppk基因缺失株及其野生株进行验证显示抗体特异性良好。结论利用pET28b(+)载体可构建奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒,表达、纯化后的蛋白与佐剂共同免疫新西兰大白兔,可获得效价高、特异性良好的兔多克隆抗体血清,为奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶的检测以及深入研究PPK在奇异变形杆菌致病中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 广州医科大学附属第二医院检验科;广州医科大学附属第二医院血液科;南方医科大学公共卫生学院//广东省热带病研究重点实验室 微生物学系;
【基金】：国家自然科学基金(81670637) 广州市属高校科技项目(1201430488) 广州医科大学青年项目(2014A06)~~
【分类号】：R446.6
【正文快照】： 奇异变形杆菌为条件致病菌,可引起尿路感染、食物中毒、肺炎等多种疾病。其中以泌尿系统感染最常见,并可导致结石的出现。最近有调查表明,奇异变形杆菌检出率在尿路感染患者分离的革兰阴性杆菌中排在第4位[1]。我们课题组则发现,奇异变形杆菌临床分离株超广谱β-内酰胺酶阳性

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本文编号：1237075