多方法检测碳青霉烯酶对比研究

发布时间：2018-01-21 05:04

本文关键词： 碳青霉烯酶改良Hodge试验 Carba NP试验快速Carba NP试验改良碳青霉烯失活法抑制剂增强改良碳青霉烯失活法　出处：《河北医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:分析培养时间、培养基对受试菌株Carba NP试验(CNP)的影响;研发快速Carba NP试验(RCNP),对其检测碳青霉烯酶的效果进行评价,并同改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验、改良碳青霉烯失活法(m CIM)对比分析;研发“0.5+9h孵育模式”,对其在m CIM中的临床应用价值进行评估;研发抑制剂增强改良碳青霉烯失活法(im CIM),对其在B类碳青霉烯酶检测中的价值进行探讨,并同EDTA纸片增效试验(EDPT)对比分析。以期在流行病学调查、院内感染控制、耐药基因分型方面为临床实验室提供多指标分析研究。方法:1临床分离的264株病原菌作为研究对象,其中肺炎克雷伯菌69株、大肠埃希菌60株、鲍曼不动杆菌68株、铜绿假单胞菌67株,使用血琼脂平板培养6h、12h、24h及保存7d的菌株行Carba NP试验。2受试菌株转种于中国蓝琼脂平板、麦康凯琼脂平板、MH平板、营养琼脂平板、含锌离子的营养琼脂平板分别进行培养,行Carba NP试验检测碳青霉烯酶。3自制碳青霉烯酶检测液,建立快速Carba NP试验,采用研磨法代替孵育受试菌株,以聚合酶链反应(PCR)结果作为金标准,并同改良Hodge试验、Carba NP试验及改良碳青霉烯失活法比较。4采用“0.5+9h孵育模式”行m CIM检测碳青霉烯酶,采用im CIM和EDPT筛查B类碳青霉烯酶,应用一致性检验、Mc Nemarχ2检验、Wilcoxon符号秩和检验及ROC曲线进行数据统计与分析。结果:1培养24h菌株行Carba NP试验敏感度和特异度分别为95.1%(121/144)和96.7%(116/120)。6h和12h培养的菌株行Carba NP试验敏感度分别为84.0%(121/144)和91.7%(132/144),相比24h培养的菌株敏感度有所下降,但其特异度仍为96.7%(116/120),与24h培养菌株无差别。所有菌株储存7天后Carba NP试验结果均无变化,与24h培养菌株的敏感度和特异度一致。6h、12h、24h培养的菌株Kappa值分别为0.796、0.878、0.916。2血琼脂平板上分离菌株行Carba NP试验敏感度和特异度分别为95.1%(137/144)、95.8%(115/120),Kappa值0.908;选择培养基(中国蓝琼脂平板、麦康凯琼脂平板)的敏感度分别为87.5%(126/144)、83.3%(120/144),Kappa值分别为0.810、0.758;MH平板的敏感度和特异度分别为88.2%(127/144)、95.0%(114/120),Kappa值0.826;营养琼脂平板的敏感度仅为79.9%(115/144),Kappa值0.714;含锌离子的营养琼脂平板敏感度有所提高,为93.8%(135/144),Kappa值0.855。3改良Hodge试验敏感度和特异度分别为75.0%(108/144)、87.5%(105/120),Kappa值0.616;Carba NP试验敏感度和特异度分别为91.7%(132/144)、97.5%(117/120),Kappa值0.886;改良碳青霉烯失活法敏感度和特异度分别为94.5%(136/144)、97.5%(117/120),Kappa值0.916;快速Carba NP试验敏感度和特异度分别为89.6%(129/144)、99.2%(119/120),Kappa值0.879。采用Mc Nemarχ2检验对CNP、CIM及RCNP进行比较,其χ2值分别为244.58、218.51,P值均0.01。4采用“0.5+9h孵育模式”行m CIM对A、B类碳青霉烯酶有较高的检出率,im CIM敏感度和特异度分别为85.71%(66/77)和97.86%(183/187),Kappa值0.859;EDPT敏感度和特异度分别为66.23%(51/77)和88.77%(166/187),Kappa值0.561。im CIM抑菌圈差值(Δdim CIM)与EDPT抑菌圈差值(Δd EDPT)有差别,差异有统计学意义(P0.05)。im CIM与EDPT的ROC曲线下面积分别为0.988(95%CI:0.977~0.999)、0.936(95%CI:0.909~0.963)。结论:1 Carba NP试验对于产A类碳青霉烯酶的菌株,培养6h、12h及保存7d的菌株同培养24h无差别,在1个工作日内即可明确菌株是否产酶,但对产B、D类碳青霉烯酶菌株的检出率有一定影响。2采用血琼脂平板上生长的菌株行Carba NP试验能够准确、快速的检测出产碳青霉烯酶菌株,采用麦康凯琼脂平板、中国蓝琼脂平板、MH平板、营养琼脂平板上生长的菌株行Carba NP试验检测碳青霉烯酶易导致假阴性。3快速Carba NP试验通过用研磨法代替孵育受试菌株,15min内即可发现产酶菌株,较Carba NP试验更为快速,提高了院内感染监测的时效性,有利于大批量的流行病学调查。4 Carba NP试验相比改良Hodge试验操作简单、分析速度快、适用范围广、敏感度和特异度高,有利于及时准确地发现产碳青霉烯酶菌株,并对B类碳青霉烯酶有较高的检出率。5改良碳青霉烯失活法是一种廉价、高效、稳定的碳青霉烯酶检测方法,有助于提高产碳青霉烯酶菌株的检出率,在医院感染监控中有重要价值。6改良碳青霉烯失活法“0.5+9h孵育模式”的建立可为早期院感控制提供依据,im CIM较EDPT用于检测B类碳青霉烯酶敏感度、特异度较高,结果易于观察判断,且其步骤简单,易于操作,适合在临床工作中开展。
[Abstract]:Objective : To analyze the effect of culture time and culture medium on Carba NP assay ( CNP ) of the tested strain , develop fast Carba NP test ( RCNP ) , evaluate the effect of Carba NP assay ( RCNP ) , and compare it with modified Hodge test ( MHT ) , Carba NP test and modified C - penienem - loss method ( m CIM ) . The results showed that the sensitivity and specificity of Carba NP were 95.1 % ( 121 / 144 ) and 91.7 % ( 132 / 144 ) respectively . The results showed that the sensitivity and specificity of Carba NP were 95.7 % ( 121 / 144 ) and 97.7 % ( 132 / 144 ) respectively . The sensitivity and specificity of CIM and EDPT were 85.71 % ( 66 / 77 ) and 97.86 % ( 183 / 187 ) , Kappa value 0.859 , EDPT sensitivity and specificity were 66.23 % ( 51 / 77 ) and 88.77 % ( 166 / 187 ) , Kappa value 0.561 . im CIM bacteriostatic ring difference ( 螖dim CIM ) was 0.988 ( 95 % CI : 0.977 ~ 0.999 ) , 0.9936 ( 95 % CI : 0.909 ~ 0.9963 ) , respectively . Conclusion : 1 Carba NP assay is a cheap , efficient and stable method for the detection of Carbapenem - producing strains .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R446.5

【参考文献】