靶向EGFRvⅢ并包裹液态氟碳高分子纳米球的制备及其性质研究
发布时间:2018-02-26 14:33
本文关键词: 表皮细胞生长因子受体突变体III ~(131)I 靶向超声造影剂 出处:《重庆医科大学》2017年硕士论文 论文类型:学位论文
【摘要】:目的:制备以EGFRvⅢ为靶点,EGFRvⅢ的单抗4G1为靶向分子的靶向高分子纳米超声造影剂,并对其性质及体外靶向能力进行研究。第一部分表皮生长因子受体突变体III(EGFRvⅢ)单抗4G1的特异性验证方法:培养胶质瘤细胞F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)和F98_(npEGFRvⅢ)(EGFR-/EGFRvⅢ+),对细胞蛋白进行免疫印迹(WB)实验以验证抗体4G1对EFGRvⅢ蛋白的特异性;对F98EGFR和F98_(npEGFRvⅢ)细胞进行流式细胞术(FCM)和免疫荧光(IF)实验以验证抗体4G1与EFGRvⅢ阳性细胞的特异性结合;氯胺T法制备~(131)I-4G1,以探究抗体4G1与细胞稳定结合的最佳时间。结果:4G1与F98_(npEGFRvⅢ)细胞蛋白结合出现免疫印迹条带,而不与F98EGFR细胞蛋白结合出现免疫印迹条带;4G1与F98_(npEGFRvⅢ)细胞的结合率为(90.84±0.56)%,与F98EGFR细胞的结合率仅为(2.90±0.07)%;荧光显微镜下,F98_(npEGFRvⅢ)细胞的胞核呈蓝色,细胞膜呈绿色荧光,F98EGFR仅有胞核呈蓝色,细胞膜外无绿色荧光;氯胺T法制备的13lI-4G1在30 min、60 min、120 min、240 min和480 min时与F98_(npEGFRvⅢ)细胞的结合率分别为(39.45±0.06)%、(49.19±0.48)%、(69.64±0.19)%、(59.19±0.63)%和(55.79±0.69)%,与F98EGFR细胞在各个时间点的结合率分别为(2.91±0.21)%、(2.97±0.75)%、(2.95±0.65)%、(2.96±0.43)%和(3.02±0.50)%。结论:单抗4G1仅能够特异性地识别EGFRvⅢ阳性细胞蛋白,13lI-4G1仅与EGFRvⅢ阳性的F98_(npEGFRvⅢ)细胞特异性结合,且在120min时与F98_(npEGFRvⅢ)细胞的结合率最高。第二部分携EGFRvⅢ抗体4G1的PLGA纳米球的制备及其性质研究方法:采用双乳化溶剂挥发法制备包裹液态氟碳的高分子纳米球(P-NPs);碳二亚胺法(EDC/NHS)偶联P-NPs与4G1抗体,获得靶向EGFRvⅢ的高分子纳米球P-NPs-4G1;光镜和扫描电镜下观察P-NPs-4G1的形态及分布特征;激光粒径仪检测P-NPs-4G1的粒径及Zeta电位;流式细胞术与激光共聚焦显微镜检测P-NPs与4G1的偶联情况;倒置荧光显微镜下观察热作用致P-NPs-4G1相变前后情况;超声诊断仪检测P-NPs-4G1在体外经低强度聚焦超声(LIFU)辐照致相变前后情况;流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测P-NPs-4G1在体外与肿瘤细胞的靶向结合情况;在裸鼠肿瘤模型上,检测P-NPs-4G1在体内的靶向超声显像情况。结果:所制备的P-NPs-4G1纳米球外观呈乳悬液状;光镜下形态规则,呈球形;电镜下呈球形或类球形,表面光滑,形态规则;粒径仪测得P-NPs-4G1的平均粒径为(563.8±60.3)nm,表面电位(-32.4±3.37)m V;P-NPs与4G1的连接率为(97.37±1.57)%;P-NPs-4G1体外经热作用后可发生明显的液气相转变产生微气泡;经LIFU辐照后发生相变而产生微气泡,超声波诊断仪检测超声显像效果增强;在体外靶向实验中证实P-NPs-4G1可与EGFRvⅢ阳性的F98_(npEGFRvⅢ)(EGFR-/EGFRvⅢ+)细胞特异性结合,而不与EGFR阳性的F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)细胞结合;在裸鼠肿瘤模型上,P-NPs-4G1经尾静脉注射、LIFU辐照后的体内超声显像未得到理想的结果。结论:本研究成功制备出能够特异性靶向EGFRvⅢ并包裹液态氟碳的高分子纳米球P-NPs-4G1,其性质稳定,在体外经声热作用后可发生液气相转变,增强超声显像效果,在体外能特异性的与EGFRvⅢ阳性肿瘤细胞结合。
[Abstract]:Objective : To investigate the specific binding rate of F98EGFR ( EGFR + / EGFRv 鈪,
本文编号:1538415
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