蛋白质芯片技术检测aGVHD患者22种血清生物标志物的临床意义

发布时间：2018-03-13 07:48

  本文选题：急性移植物抗宿主病　切入点：异基因造血干细胞移植　出处：《第三军医大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplant,allo-HSCT)是治疗血液恶性疾病的有效手段。急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,a GVHD)是allo-HSCT常见的并发症,严重影响了移植患者的存活率及生存质量,同时也是allo-HSCT患者非复发死亡的主要原因。现阶段,机体受损靶器官的临床表现和病理检查是a GVHD诊断的主要依据,但由于其临床症状多变且缺乏特异性,在临床诊疗中有创的病理检查常常因为各种原因而无法进行,导致其诊断的及时性受到影响。因此,找到快捷、无创、实用的实验室方法,让a GVHD患者在疾病早期就可以得到诊断并尽早治疗,从而更有效地控制a GVHD是临床上迫切需要解决的问题。蛋白质芯片技术是一门微机械、微电子并与生命科学相结合的新兴技术,具有高特异性、高灵敏度、自动化、微型化等特点。本研究采用夹心法膜蛋白质芯片技术检测异基因造血干细胞移植术后发生a GVHD和无a GVHD患者的22种血清生物标志物水平变化,初步筛选出和a GVHD发生发展及转归相关的分子标志物,为后续a GVHD的临床早期干预和预后评估奠定基础。方法:连续定点收集于2014年11月至2015年11月在第三军医大学新桥医院血液科进行allo-HSCT患者移植-7d、+7d、+14d、+28d、+56d、+100d血清标本。选取10名发生a GVHD的患者作为实验组,在未发生a GVHD患者中随机抽取10名作为对照组。采用蛋白质芯片技术检测两组患者在移植前后不同时间点22种血清生物标志物(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12p40、IL-17A、IL-21、IL-22、IL-23、MIF、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、Elafin、ST2、TLR4、TNFR1、v WF、TF)的含量。采用AAH-CUST的数据分析软件对芯片检测结果进行数据预分析,并进行t检验,数据以“均数±标准差(?)”表示。结果:1.蛋白芯片检测发现,a GVHD组和无a GVHD组相比较,移植-7d,a GVHD组和无a GVHD组各血清生物标志物之间无显著差异(P0.05);移植+7d,a GVHD组IL-2、IL-17A、ST2、TLR4水平显著高于无a GVHD组(P0.05);移植+14d,a GVHD组IL-2、IL-4、IL-17A、IL-21、IL-23、TNFR1水平显著高于无a GVHD组(P0.05),而IFN-γ水平显著低于无a GVHD组(P0.05);移植+28d,IL-2、IL-7、IL-17A、TNFR1,a GVHD组水平显著高于无a GVHD组(P0.05),IFN-γ水平显著低于无a GVHD组(P0.05);移植+56d,IL-1β、IL-2、IL-4、IL-7、IL-17A、IL-21、IL-23、ST2、TF,a GVHD组水平显著高于无a GVHD组(P0.05);移植+100d,a GVHD组IL-7、IL-23、TF水平显著高于无a GVHD组(P0.05)。2.Ⅲ-Ⅳ级a GVHD与II级a GVHD比较:移植-7d,IL-8血清水平前者较后者显著增高(P0.05);移植+7d,IL-1β、IL-22血清水平前者较后者显著增高(P0.05);移植+14d,两组间各血清生物标志物水平无显著差异(P0.05);移植+28d,TLR4血清水平前者较后者显著增高(P0.05);移植+56d,TNFR1血清水平前者较后者显著增高(P0.05);移植+100d,IL-21血清水平前者较后者显著下降(P0.05)。3.a GVHD组患者在治疗前后22个血清生物标志物比较,发现a GVHD患者治疗有效控制后TLR4水平较高峰时出现显著下降(P0.05)。4.激素疗效差和疗效好的a GVHD患者相比较:移植-7d,IL-7血清水平前者较后者显著降低(P0.05);移植+7d,IL-17A血清水平前者较后者显著降低(P0.05);移植+14d,两组间各血清生物标志物水平无显著差异(P0.05);移植+28d,IL-23血清水平前者较后者显著降低(P0.05);移植+56d,IL-6、IL-12p40血清水平前者较后者显著增高(P0.05);移植+100d,IL-8、IL-22、ST2、TNFR1血清水平前者较后者显著增高(P0.05)。结论:1.蛋白质芯片检测发现a GVHD组较无a GVHD组共有12个血清生物标志物(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-7、IL-17A、IL-21、IL-23、IFN-γ、ST2、TLR4、TNFR1、TF)在移植前后各不同时间点表达有显著差异,其和a GVHD的发生发展紧密相关,可将其作为a GVHD早期诊断及干预的辅助指标。2.与II级a GVHD相比,Ⅲ-Ⅳ级a GVHD有5个血清标志物(IL-1β、IL-8、IL-22、TLR4、TNFR1)高表达,1个(IL-21)低表达,表明这6个血清标志物表达水平可能和a GVHD严重程度相关,可作为Ⅲ-Ⅳ级a GVHD诊断依据,为临床针对性治疗提供参考。3.TLR4血清水平治疗后显著下降,预示a GVHD患者的治疗疗效较好,为a GVHD的免疫靶向治疗提供新的预判手段。4.3个血清标志物(IL-7、IL-17A、IL-23)低表达,6个血清标志物(IL-6、IL-12p40、IL-8、IL-22、ST2、TNFR1)高表达,可能和a GVHD的激素疗效相关,是预测患者是否对激素耐药的参考指标。
[Abstract]:Objective: allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allogeneic hematopoietic stem cell transplant, allo-HSCT) is an effective therapy for malignant hematological diseases. Acute graft-versus-host disease (acute graft-versus-host disease, a GVHD allo-HSCT) is a common complication of serious impact on transplant patient survival and quality of life, but also the non allo-HSCT patients the main causes of recurrence of death. At present, the clinical manifestations and pathological injury of target organ is the main basis for the diagnosis of GVHD a, but because of its clinical symptoms and complex and lack of specificity in clinical diagnosis and treatment of pathological examination and often for a variety of reasons can not lead to the timely diagnosis, so affected. Find, fast, non-invasive, practical laboratory method, let a GVHD patients early in the disease can be diagnosed and treated as soon as possible, so as to more effectively control A GVHD is an urgent need to solve clinical problem. Protein chip technology is a new technology of micro mechanical, microelectronics and life science and combination, with high specificity, high sensitivity, automation, miniaturization and other characteristics. This research adopts the sandwich method to detect membrane protein chip technology for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation after a GVHD and a GVHD with 22 serum biomarker levels, initial screening and a GVHD development and prognosis related molecular markers, which lays the foundation for the clinical early intervention and prognosis of subsequent a GVHD. Methods: collected continuously from November 2014 to November 2015 with allo-HSCT transplantation -7d in the Department of Hematology, Xinqiao Hospital of Third Military Medical University of +7d, +14d, +28d, +56d, +100d. A total of 10 serum samples from patients with a GVHD as the experimental group, the random a did not occur in patients with GVHD 鍙，

本文编号：1605472